人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA試劑盒雙抗體夾心ELISA法定量測定人血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清液和其他生物液體含量。

液體類標本：
包括血清，血漿，尿液，胸腹水，腦脊液，細胞培養上清液等。
血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，如保存過程中如有沉淀，請再次離心。
血漿：
應根據標本的要求選擇EDTA，檸檬酸鈉或者肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，在離心20分鐘（2000-3000轉/分），仔細收集上清，如保存過程中有沉淀，請再次離心。
尿液：
用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，如保存過程中有沉淀，請再次離心。
細胞培養上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，當細胞濃度達到100萬/ml左右，通過反復凍融，使細胞破壞并釋放細胞內的成份，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，如保存過程中有沉淀，請再次離心。
組織標本：
切割標本后，稱取重量，加入一定量的PBS（PH7.4），用液氮迅速冷凍保存備用，標本融化后仍保持2-8℃的溫度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，分裝后留一份待檢測，其余冷凍備用。

人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA試劑盒相關實驗研究：

α烯醇化酶基因調節胃癌增殖及其機制研究
摘要：α-烯醇化酶基因(ENO1)是糖酵解過程中的一種代謝酶,催化2-磷酸甘油酸轉化磷酸烯醇式丙酮酸。ENO1在多種腫瘤的發生發展中發揮重要作用,但是尚未有研究報道ENO1在胃癌中的作用,因此其在胃癌中的具體功能和發揮作用的分子機制有待深入研究。目的檢測ENO1基因在人胃癌組織及癌旁組織中的表達量,研究ENO1基因在胃癌發生發展中的重要生物學功能,并深入探討其參與胃癌發生發展的機制。方法1.首先通過免疫組織化學染色檢測ENO1在胃癌腫瘤組織及癌旁組織中的表達情況,并與TCGA數據庫中的結果進行比較;應用Kaplan-Meier法分析ENO1基因表達量與胃癌患者預后的相關性。2.應用RNA干擾技術靶向沉默胃癌細胞株ENO1基因的表達,通過CCK8實驗、克隆形成實驗、凋亡實驗、細胞周期實驗及劃痕實驗檢測ENO1對胃癌細胞株生物學功能的影響。3.應用Affymetrix人類全基因表達譜芯片檢測ENO1基因干擾前后胃癌細胞株MGC-803中全基因組mRNA表達豐度。
注意事項：
1．酶標板袋拆封后，盡快將不用的板孔放回，并放入干燥劑，保持酶標板干燥。
2．用戶在初次使用試劑盒時，應將試劑盒平衡至室溫，各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。
3，TMB A液避光保存。
4，洗板過程非常重要，不充分的洗板易導致假陽性。
5．建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
6．請保持試驗過程的連續性，禁止酶標板干燥，因干燥會使酶標板上的生物成分迅速失活。
7．為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和試管。
8．禁止混用不同批次試劑盒內的試劑。
試驗所需自備物品:
1.酶標儀(450nm波長濾光片)
2.37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
3.自動洗板機
4.高精度移液器， EP管及一次性吸頭： 0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 5.吸水紙
洗板方法： 手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的PBt或TBT洗滌緩沖液 至少 0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
樣品收集:
1.血清：全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。
2.血漿：抗凝劑推薦使用EDTA或肝素，樣品采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。
3.組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4.細胞培養上清：取細胞培養上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。
5.其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測
6.樣品應清澈透明，懸浮物應離心去除。
7.樣品收集后若在1周內進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內檢測)，或-80℃（6個月內檢測），避免反復凍融。
結果判斷:
1. 以標準品的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標， 繪制標準曲線。 如有設置復孔，則應取其平均值計算。 以標準品的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。
2. 推薦使用專業的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據樣品OD值，由標準曲線查出相應的濃度，乘以稀釋倍數；亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 1478. 若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。