人艾杜糖硫酸酯酶(IDS)ELISA試劑盒雙抗體夾心ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體含量。

液體類(lèi)標(biāo)本：
包括血清，血漿，尿液，胸腹水，腦脊液，細(xì)胞培養(yǎng)上清液等。
血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如保存過(guò)程中如有沉淀，請(qǐng)?jiān)俅坞x心。
血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA，檸檬酸鈉或者肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，在離心20分鐘（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如保存過(guò)程中有沉淀，請(qǐng)?jiān)俅坞x心。
尿液：
用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如保存過(guò)程中有沉淀，請(qǐng)?jiān)俅坞x心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右，通過(guò)反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并釋放細(xì)胞內(nèi)的成份，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如保存過(guò)程中有沉淀，請(qǐng)?jiān)俅坞x心。
組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量，加入一定量的PBS（PH7.4），用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆茫瑯?biāo)本融化后仍保持2-8℃的溫度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，分裝后留一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

人艾杜糖硫酸酯酶(IDS)ELISA測(cè)定試劑盒相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究：

α烯醇化酶基因調(diào)節(jié)胃癌增殖及其機(jī)制研究
摘要：α-烯醇化酶基因(ENO1)是糖酵解過(guò)程中的一種代謝酶,催化2-磷酸甘油酸轉(zhuǎn)化磷酸烯醇式丙酮酸。ENO1在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用,但是尚未有研究報(bào)道ENO1在胃癌中的作用,因此其在胃癌中的具體功能和發(fā)揮作用的分子機(jī)制有待深入研究。目的檢測(cè)ENO1基因在人胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)量,研究ENO1基因在胃癌發(fā)生發(fā)展中的重要生物學(xué)功能,并深入探討其參與胃癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。方法1.首先通過(guò)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)ENO1在胃癌腫瘤組織及癌旁組織中的表達(dá)情況,并與TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中的結(jié)果進(jìn)行比較;應(yīng)用Kaplan-Meier法分析ENO1基因表達(dá)量與胃癌患者預(yù)后的相關(guān)性。2.應(yīng)用RNA干擾技術(shù)靶向沉默胃癌細(xì)胞株ENO1基因的表達(dá),通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、凋亡實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)及劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ENO1對(duì)胃癌細(xì)胞株生物學(xué)功能的影響。3.應(yīng)用Affymetrix人類(lèi)全基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)ENO1基因干擾前后胃癌細(xì)胞株MGC-803中全基因組mRNA表達(dá)豐度。
注意事項(xiàng)：
1．酶標(biāo)板袋拆封后，盡快將不用的板孔放回，并放入干燥劑，保持酶標(biāo)板干燥。
2．用戶(hù)在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將試劑盒平衡至室溫，各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
3，TMB A液避光保存。
4，洗板過(guò)程非常重要，不充分的洗板易導(dǎo)致假陽(yáng)性。
5．建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測(cè)。
6．請(qǐng)保持試驗(yàn)過(guò)程的連續(xù)性，禁止酶標(biāo)板干燥，因干燥會(huì)使酶標(biāo)板上的生物成分迅速失活。
7．為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。
8．禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。
試驗(yàn)所需自備物品:
1.酶標(biāo)儀(450nm波長(zhǎng)濾光片)
2.37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
3.自動(dòng)洗板機(jī)
4.高精度移液器， EP管及一次性吸頭： 0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 5.吸水紙
洗板方法： 手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的PBt或TBT洗滌緩沖液 至少 0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
樣品收集:
1.血清：全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原，無(wú)內(nèi)毒素試管。
2.血漿：抗凝劑推薦使用EDTA或肝素，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)。避免使用溶血，高血脂樣品。
3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測(cè)。
5.其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)
6.樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。
7.樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè))，或-80℃（6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)），避免反復(fù)凍融。
結(jié)果判斷:
1. 以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。 如有設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計(jì)算。 以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
2. 推薦使用專(zhuān)業(yè)的曲線(xiàn)制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的擬合方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。 1478. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。