·         產品名稱：CNE2細胞|人鼻咽癌細胞 CNE2 含STR鑒定

·         細胞數量： 1*10^6

·         細胞來源： atcc

·         細胞種屬： 人鼻源

·         生長特性： 貼壁

·         培養基： DMEM+10%FBS

·         形態特征： 成纖維細胞

·         傳代方法： 1:2 - 1:3

·         培養條件： 胎牛血清至終濃度為10％。環境：空氣，95％;二氧化碳（CO2），5％；溫度，37℃

·         細胞描述： 當培養物達到穩定期時，細胞表現出酶肌激酶和肌酸磷酸激酶（CPK）的活性增加。 肌肉型CPK在細胞分裂停止后合成。

·         細胞凍存： 液氮凍存（凍存液基礎培養基+20%FBS+10%DMSO）

·         細胞運輸： 干冰運輸（2ml凍存管）或活細胞運輸（T25瓶）

CNE2細胞|人鼻咽癌細胞 CNE2 含STR鑒定 -注意事項

凍存細胞接收后的處理：

1.干冰運輸，收到細胞后立即轉入-80℃冰箱短暫中轉或直接復蘇；
2.收到細胞后，若發現干冰已經*揮發、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯系。
 

復蘇細胞接收后的處理：

1.收到細胞后，請首先檢查培養瓶是否破損或漏液，培養液是否混濁，如有漏液及培養液混濁情況請立即拍照把圖片發給我們。
2.75%酒精消毒瓶身后放培養箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認細胞狀態并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細胞脫落，可收集上清離心，將沉淀用新的培養基接種至新的培養瓶或培養皿中。
3.建議收到當天不要消化處理，如果細胞長滿90%，可選擇傳代處理。
4.如您收到細胞3天內沒有反饋相關問題，出現的細胞問題將不提供免費重發服務。
 

細胞操作說明
請仔細閱讀本操作說明及相應的細胞說明書。
一、 收貨
<1>本公司細胞發貨有四種形式：T25瓶、離心管、血清及干冰。
① T25是用T25細胞培養瓶直接發貨的形式。收到細胞后，拆開包裝T25瓶的自封袋，不拆封口膜，表面噴75%酒精消毒后顯微鏡觀察細胞狀態（有條件可以拍下此時細胞照片）。將細胞放入37度培養箱平衡兩小時以上，再處理細胞。首先將T25中培養基取出裝好備用，如細胞密度高于80%，可以直接消化傳代，相反則加入5-6mL培養基放回培養箱繼續培養即可。
② 離心管是用15mL離心管發貨的方式，只用于懸浮細胞發貨。收到細胞后消毒處理及平衡參考上述T25瓶。平衡完成后，離心（1000rpm，3min）收集細胞，棄上清，用新的培養基重懸細胞并接種至培養瓶或皿中，放回培養箱繼續培養。
③ 血清是用牛血清直接發貨的形式，是細胞凍存管加入含有細胞的牛血清的形式。收到細胞后，拆開自封袋，凍存管表面噴75%酒精消毒后，在超凈臺中打開凍存管，將細胞用1mL槍頭輕輕幾次以將細胞吹勻，接種至含有預熱的培養基的培養瓶或皿中，顯微鏡下觀察細胞是否吹勻，如果沒有吹勻，繼續吹勻至3-5個細胞一團，放回培養箱繼續培養。
④ 干冰是用本公司凍存液凍存細胞后，直接用干冰將凍存的細胞冷凍發貨的形式。收到細胞后按照細胞復蘇的步驟操作即可。
<2>相關問題
① 如不能在收到細胞后及時操作細胞，T25及離心管發貨的細胞可以消毒后在37度過夜，血清發貨的細胞可以在室溫下靜置1-2天（注意不要放冰箱），干冰發貨的可以在確認干冰未*升華時將細胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰*升華，請即刻復蘇細胞。
② T25瓶及離心管在培養箱平衡是為了讓細胞盡快適應培養箱環境，同時使部分因運輸導致脫落的細胞貼壁，此步驟非常必要。T25瓶如果在顯微鏡下可以看到部分不貼壁的細胞，可以收集上清后離心（1200rpm，5min）后，將沉淀用新的培養基重懸后接種至新的培養瓶或皿中。
③ 部分細胞在運輸過程中，由于不斷震蕩及環境不適，可能導致細胞破碎死亡，從而使培養基中漂浮很多細胞碎片及顆粒狀物質。這種情況下，平衡后，貼壁細胞用PBS洗兩遍在加新的培養基培養或者傳代至新瓶中培養即可；懸浮細胞可以離心（1000rpm，3min）收集細胞，并用PBS重懸后再離心一次，再用新的培養基重懸并接種細胞。
二、 細胞培養及傳代
<1>細胞培養
① 細胞請于細胞培養箱中培養，大部分細胞是37℃，5% CO2，濕度100%環境下培養的。有極少部分細胞培養條件不一致，請仔細閱讀相應的細胞說明書，使用正確的培養基及培養條件；
② 細胞于培養瓶或皿中培養，加入適量說明書上標注的細胞相應*培養基（一般液面高度2-3mm即可）。
<2>細胞傳代（以下步驟適用于10cm皿）
① 細胞培養至密度達80%以上時即可傳代，先將細胞培養基取出3mL用15mL離心管裝好，其他培養基全部吸干舍棄；
② 培養皿加入2-3mL無菌PBS，輕輕晃動皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍棄；
③ 加入1mL胰酶，輕輕晃動皿，使胰酶浸沒到皿底所有部位，將皿蓋好放入培養箱中消化；
④ 3min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞不再貼壁，即可加入di一步收集的培養基混勻；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至不貼壁為止；
⑤ 將細胞懸液均勻分成幾份，分別加入不同培養皿中，補加新培養基后放回培養箱培養。
<3>相關問題
① 部分細胞在傳代后時，會有以下現象：細胞內會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養基漂浮一些死細胞或者細胞長的極慢。出現以上現象時，可以咨詢本公司技術人員此現象是否正常及相關處理方式，不要頻繁換液，大多數細胞1周換液2-3次即可。
② 細胞碎片較多、背景較臟時，貼壁細胞用PBS漂洗兩次、懸浮細胞打散后低速離心（900rpm，3min）能有效改善。
③ 傳代比例建議1:2-1:3，長得比較快的細胞可以1：3，比較慢的按1:2傳代。傳代后，建議不要使用傳代前培養所使用的培養基，會有大量細胞碎片甚至導致細胞死亡的風險。
④ 細胞狀態不好或者生長極慢的時候，可以通過增加血清濃度調整細胞狀態及生長速度。
⑤ 請不要隨意更換培養基，因實驗需要，可以逐步馴化。
懸浮傳代：混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用*培養基重懸接種到新的培養皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗一次。