人苯丙氨酸(LPA)ELISA試劑盒操作步驟   

  檢測方法：elisa酶聯免疫分析法ELISA生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗方法。其試劑穩定、易保存，操作簡便。凡購買本公司試劑盒非人為質量問題，收貨后十五個工作日內包退換。
規格：96T/48T
主要成分:酶標板,試劑,標準品等
性狀：盒裝液體
Elisa測定試劑盒用途：科研與實驗試劑，不得用于臨床診斷。
標本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
人苯丙氨酸(LPA)ELISA試劑盒實驗材料與試劑配制：
1. 儀器與材料：酶標儀（使用前預熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。
2. 緩沖液使用：加5ul 的緩沖液于50ul 的樣品中，如果樣品量不夠或者不確定，緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可。 混勻，靜置1小時備用（如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略）。
3. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液備用。
elisa試劑盒操作步驟樣品收集、處理及保存
1. 細胞培養上清：適用于檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
2. 細胞：用PBS反復洗滌細胞3次，調整細胞濃度達到104 -106 /ml 左右，通過反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內成份，或 者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。
3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。
4. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上 清。
5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
6. 組織標本：切取組織標本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進行檢測。
7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-70 ℃保存，避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀，應再次離心。血液標 本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解 凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
elisa試劑盒操作步驟操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準 品組（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。 注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。
3. 加樣：依照標準品的順序分別加入 50ul 的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水；其余微孔中加入 50ul 的待測樣本。
4. 加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標溶液（空白對照孔除外）。
5. 溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于 37℃恒溫孵育 1 小時。
6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置 15-30s，充分清洗酶標板 5 次，用吸水紙*拍干。
7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止：25-37℃下避光反應 10-15 分鐘，加入 50ul 終止液。 9. 讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。 
注意事項：
1. 實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時間間隔過大，否則將會導致不同的預孵育時間，從而影響 實驗的準確性以及重復性。
3. 孵育：嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行。
4. 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化，如果顏色較深，請提前加入終止液終止反應。
5. 建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應的稀釋倍數。
6. 建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經銷商， 如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調換，但概不承擔產品本身以外的任何損失。