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產(chǎn)品名稱：HT22細胞|HT22小鼠海馬神經(jīng)元細胞系
包裝：內(nèi)層無菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說明書
細胞來源：ATCC、sciencell、ICLC
貨期：1-2周
運輸方式：快遞運輸
售后：收到細胞后12天，如發(fā)現(xiàn)細胞有質(zhì)量問題（如污染，死亡，快遞運輸?shù)仍颍r，應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報告并及時通知銷售人員，我們將盡快為您解決！
- HT22細胞|HT22小鼠海馬神經(jīng)元細胞系
- 三、細胞生長條件：
- 組成：
組份 | 數(shù)目 |
細胞 | 1 T-25瓶 |
細胞說明書 | 一份 |
- 細胞簡介：
生長特性： | 貼壁生長
|
細胞來源： | 從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進 |
培養(yǎng)條件： | 培養(yǎng)基：1640 +10%FBS（推薦德國BI 04-002-1A 優(yōu)等胎牛血清） 氣相：空氣95%，二氧化碳5% 溫度：37℃ |
培養(yǎng)： |
1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行2-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代； 2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進行傳代，di一次傳代比例為1:2。 3傳代步驟：將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（di一次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為*消化時間，記錄*消化時間，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細胞，進行傳代。
二、懸浮細胞 1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒，然后置于無菌操作臺，打開瓶口，輕輕吹打后，將其中的細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，然后1200rpm離心3min，去上清； 2.將離心好的細胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基，然后將其置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液（離心后去舊液，加入新鮮培養(yǎng)基）； 3.顯微鏡觀察細胞數(shù)目比較多時，對其進行傳代，di一次傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培養(yǎng)）。
|
細胞總數(shù)： | 1~3*106 |
傳代周期： | 2-3天 |
傳代比例： | 1:2~1:4 |
換液頻率： | 2-3天 |
凍存液： | 90%FBS+10%DMSO |
三、 細胞凍存
<1>凍存操作
① 凍存液配方：建議使用92%FBS+8%DMSO，客戶自身實驗室所使用的凍存液也可以適用，血清濃度不低于30%，DMSO含量不高于12%即可。
② 收集細胞按照以上細胞傳代步驟操作至第④步后，將細胞懸液收集入15mL離心管，離心（1200rpm，3min）；
③ 棄上清，加入配制好的凍存液，重懸細胞，懸液加入無菌凍存管中；
④ 將凍存管在4℃靜置10min，后將之正置于室溫下的厚壁有蓋泡沫盒中，蓋緊盒蓋，放入-80℃冰箱過夜，第二天放入液氮即可長期保存。
<2>相關(guān)問題
① 10cm皿的細胞長滿一般可以凍存2-3管，部分細胞長的比較慢，凍存的細胞密度要稍微大點，以防止復(fù)蘇后生長困難。
② 凍存液中含的DMSO請使用細胞級DMSO，同時濃度不要太高。部分細胞在10%DMSO條件下凍存會死亡，所以DMSO濃度5%-8%是比較推薦的濃度。
③ 細胞凍存及復(fù)蘇遵循慢凍快融的原則，即凍存時溫度不能急劇下降，應(yīng)控制溫度緩慢下降。復(fù)蘇時應(yīng)快速融化，融化后盡快加入培養(yǎng)基中。
④ 凍存時建議設(shè)置凍存檢測，即取0.2-0.3mL的凍存液重懸的細胞于一個凍存管中，與正常體積凍存的細胞共同凍存，至液氮后復(fù)蘇檢查凍存結(jié)果。凍檢合格前，留一部分細胞繼續(xù)培養(yǎng)，以防萬一。
四、 細胞復(fù)蘇
<1>復(fù)蘇步驟
① 將凍存細胞從液氮中取出后迅速放入37℃溫水中搖晃融化，時間1min左右；
② 于1000rpm離心1min，棄凍存液，加入1mL新的*培養(yǎng)基重懸細胞；
③ 接種至新培養(yǎng)瓶或皿中，補加足量*培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
<2>相關(guān)問題
① 復(fù)蘇過程應(yīng)迅速操作，時間不能太長。
② 復(fù)蘇過程中注意污染，小心操作。
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