RM-1細胞|RM-1小鼠前列腺癌細胞
形態特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 CHO-HCV-C細胞整合有丙型肝炎病毒的Core基因,能穩定表達C蛋白,是HCV基礎研究的*摸型。它由武漢大學病毒學國家重點實驗室郭佳博士于2008年構建并保存。
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-C培養條件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C15
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
細胞周期分為細胞間期和細胞分裂期,細胞間期較長,而細胞分裂期較短。
細胞間期是為細胞分裂的準備時期,表現為細胞增大,營養物質增多。細胞分裂期則是一個細胞由兩個細胞分解為一個細胞的過程。
細胞是生命的基本單位,細胞的特殊性決定了個體的特殊性,因此,對細胞的深入研究是揭開生命奧秘、改造生命和征服疾病的關鍵。細胞生物學已經成為當代生物科學中發展快的一門學科,是生物、農學、醫學、畜牧、水產和許多生物相關專業的一門必修課程。
依據細胞種類和濃度,于無菌操作臺內取 10 ml培養基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養基, 混 合均勻,放入37 °C,5 % CO2 培養箱培養。
注意事項
凍存細胞接收后的處理:
1.干冰運輸,收到細胞后立即轉入-80℃冰箱短暫中轉或直接復蘇;
2.收到細胞后,若發現干冰已經*揮發、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯系。
復蘇細胞接收后的處理:
1.收到細胞后,請首先檢查培養瓶是否破損或漏液,培養液是否混濁,如有漏液及培養液混濁情況請立即拍照把圖片發給我們。
2.75%酒精消毒瓶身后放培養箱中靜置4-6h后,在顯微鏡下確認細胞狀態并拍照100倍和200倍的照片,若有貼壁細胞脫落,可收集上清離心,將沉淀用新的培養基接種至新的培養瓶或培養皿中。
3.建議收到當天不要消化處理,如果細胞長滿90%,可選擇傳代處理。
4.如您收到細胞3天內沒有反饋相關問題,出現的細胞問題將不提供免費重發服務。
細胞培養方法:
- 細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。 RM-1細胞|RM-1小鼠前列腺癌細胞 -如何培養該細胞?
細胞培養是當前細胞生物學乃至整個生命科學研究與生物工程中基本的實驗技術。
細胞培養為疫苗生產、藥物研制與腫瘤防治等醫學實踐提供了全新的手段。細胞培養包括原核生物細胞,入細菌;真核單細胞生物,入酵母菌、四膜蟲等;植物細胞與細胞的培養以及于此密切相關的病毒的培養。
細胞培養
體外培養的細胞可分為原代細胞(primary culture cell)與傳代細胞(subculture cell)。原代細胞是指機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養,適應在體外培養下條件下持續傳代培養的細胞稱為傳代細胞。
分散的細胞懸液在培養瓶中很快(在幾十分鐘至數小時內)就貼附在瓶壁上,這就稱為細胞貼壁。
分散呈圓球形的細胞一經貼壁就迅速鋪展并開始有絲分裂,逐漸形成致密的細胞單層,稱為單層細胞(sigle layer cell),這種培養方法稱為單層細胞培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
如果漂浮的死細胞多,說明細胞有很多老化的,建議每次傳代的時候,在用胰酶消化之前,用PBS將細胞漂洗一遍,胰酶消化的時間要把握好,37℃2-3min即可,及時終止反應,否則胰酶消化過度對細胞損傷較大,也會有很多死細胞出現的;吹打細胞的動作要輕柔。
體外培養的細胞,不論是元代細胞還是傳代細胞一般不包吃體內原有的細胞形態。但大體可以分為兩種基本形態:成纖維樣細胞(fibroblast like cell)與上皮樣細胞(epitbelial like cell)。此外還有一些可移動的游走細胞。
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