·         產品名稱：Ocut-2C細胞|Ocut-2C人甲狀腺癌細胞操作步驟

·         細胞數量： 1*10^6

·         細胞來源： atcc

·         組織來源：人甲狀腺

·         細胞種屬： 人源

·         生長特性： 貼壁

·         培養基： DMEM+10%FBS

·         形態特征： 成纖維細胞

·         傳代方法： 1:2 - 1:3

·         培養條件： 胎牛血清至終濃度為10％。環境：空氣，95％;二氧化碳（CO2），5％；溫度，37℃

·         細胞描述： 當培養物達到穩定期時，細胞表現出酶肌激酶和肌酸磷酸激酶（CPK）的活性增加。 肌肉型CPK在細胞分裂停止后合成。

·         細胞凍存： 液氮凍存（凍存液基礎培養基+20%FBS+10%DMSO）

·         細胞運輸： 干冰運輸（2ml凍存管）或活細胞運輸（T25瓶）

Ocut-2C細胞|Ocut-2C人甲狀腺癌細胞操作步驟

注意事項

凍存細胞接收后的處理：

1.干冰運輸，收到細胞后立即轉入-80℃冰箱短暫中轉或直接復蘇；
2.收到細胞后，若發現干冰已經*揮發、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯系。
 

復蘇細胞接收后的處理：

1.收到細胞后，請首先檢查培養瓶是否破損或漏液，培養液是否混濁，如有漏液及培養液混濁情況請立即拍照把圖片發給我們。
2.75%酒精消毒瓶身后放培養箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認細胞狀態并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細胞脫落，可收集上清離心，將沉淀用新的培養基接種至新的培養瓶或培養皿中。
3.建議收到當天不要消化處理，如果細胞長滿90%，可選擇傳代處理。
4.如您收到細胞3天內沒有反饋相關問題，出現的細胞問題將不提供免費重發服務。
 

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

1. 為什么培養的細胞要及時傳代？
    答：體外培養的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續。
2.培養液pH下降很快可能原因有哪些？其解決辦法是什么？
    答：通常細胞生長得非常快時，pH值通常下降得很快。此時可以及時傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決。此外，培養瓶蓋擰得太緊、NaHCO3 緩沖系統緩沖能力不夠、培養液中鹽濃度不正確、細菌、酵母或真菌污染等也能導致pH值通常下降得很快。
       (1)按培養液中NaHCO3 濃度增加或減少培養箱內CO2 濃度，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3對應CO2濃度為5％到10％。
       (2)改用不依賴CO2培養液。
       (3)松開瓶蓋1/4 圈。加HEPES 緩沖液至10 到25mM終濃度。
       (4)在CO2 培養環境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks 鹽配制的培養液。
       (5)如果是污染造成的則丟棄培養物或用抗生素除菌。
3.培養液pH對細胞生長的影響？
    答：由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對細胞生長將產生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養用液時，需要注意一點：培新配的培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。
4.購買之細胞冷凍管經解凍后，為何會發生細胞數目太少之情形？
    答：研究人員在冷凍細胞之培養時出現細胞數目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應待細胞生長隔夜后再更換培養基即可。但對于DMSO敏感的細胞，還是復蘇細胞時，用離心去除DMSO比較好。