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小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒操作步驟

來源:上海琛藝實業有限公司   2019年09月09日 11:05  

 上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發、生產、經營為一體的專業化生物工程公司。公司酶科品牌ELISA試劑盒研發的種屬涵蓋:人,大鼠,小鼠,豬,牛,羊,兔,植物,農殘類,魚類等。具有完善的實驗技術開發平臺,成熟的抗原、抗體研發系統,熟練掌握各種酶聯技術,結合公司的研發團隊,可以有效的保證公司產品強的穩定性和高的準確性,同時又具有競爭力的價格。公司目前主要提供生化試劑、分子生物學試劑及試劑盒,各種抗體及免疫學試劑盒、實驗耗材等多門類上萬種產品,產品涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領域。

中文名稱:小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒操作步驟

英文名稱:Rat Folic acid,FA ELISA kit

規格:96T/48T

品牌:琛藝酶科

英文縮寫:CAMP

種屬:小鼠ELISA試劑盒

檢測波長:450nm

所需樣本體積:50-100ul

適用范圍:僅供科研

庫存:現貨

保存及有效期:2-8℃,六個月

檢測目的:用于測定血清,血漿及相關液體等樣本。

例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦斧液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。

琛藝供應的種屬有:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELSA試劑盒等

上海琛藝實業長期代做人、大鼠、小鼠、兔子、豚鼠、豬、雞、犬、猴子、羊、牛等種屬elisa實驗。

本試劑僅供研究使用

目的:本試劑盒用于測定血清,血漿及相關液體樣本中大鼠葉酸(FA)的含量。

實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中 大鼠葉酸(FA)水平。用純化的 大鼠葉酸(FA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入大鼠葉酸(FA),再與HRP標記的 大鼠葉酸(FA)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 大鼠葉酸(FA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中 大鼠葉酸(FA)濃度。

小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒操作步驟-elisa試劑盒組成及保存:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1份

1份

 

封板膜

2片(48)

2片(96)

 

密封袋

1個

1個

 

酶標包被板

1×48

1×96

 

標準品

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

標準品稀釋液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶標試劑

3 ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑A液

3 ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑B液

3 ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

終止液

3 ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

濃縮洗滌液

(20ml×20倍)×1瓶

(20ml×30倍)×1瓶

2-8℃保存

    

檢測原理

三、技術流程

雙抗體夾心法(檢測未知抗原)

間接法(檢測未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
3、加酶標抗體:于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

操作步驟補充:

 

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被促紅細胞生成素受體(EPOR)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促紅細胞生成素受體(EPOR)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

  1. 酶標儀(450nm)
  2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

 

 

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