上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發、生產、經營為一體的專業化生物工程公司。公司酶科品牌ELISA試劑盒研發的種屬涵蓋：人，大鼠，小鼠，豬，牛，羊，兔，植物，農殘類，魚類等。具有完善的實驗技術開發平臺，成熟的抗原、抗體研發系統，熟練掌握各種酶聯技術，結合公司的研發團隊，可以有效的保證公司產品強的穩定性和高的準確性，同時又具有競爭力的價格。公司目前主要提供生化試劑、分子生物學試劑及試劑盒，各種抗體及免疫學試劑盒、實驗耗材等多門類上萬種產品，產品涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領域。

中文名稱：人核基質蛋白22(NMP-22)ELISA檢測試劑盒*

英文名稱：human  Folic acid,FA ELISA kit

規格：96T/48T

品牌：chenyi

英文縮寫：CAMP

種屬：人ELISA試劑盒

檢測波長:450nm

所需樣本體積：50-100ul

適用范圍：僅供科研

庫存：現貨

保存及有效期:2-8℃,六個月

檢測目的:用于測定血清,血漿及相關液體等樣本。

例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦斧液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。

琛藝供應的種屬有:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELSA試劑盒等

上海琛藝實業長期代做人、大鼠、小鼠、兔子、豚鼠、豬、雞、犬、猴子、羊、牛等種屬elisa實驗。

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被超氧化物歧化酶（SOD）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的超氧化物歧化酶（SOD）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1.   試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
2.   實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.   濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，終結果乘以5才是樣本實際濃度。
4.   嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、20、40、80、160、320 U/mL

人核基質蛋白22(NMP-22)ELISA檢測試劑盒*

技術流程

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.   手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.   自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.   設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.   樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4.   除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.   棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

ELISA試劑盒的正確選購與運用尤為重要。尤為是關于新手而言，掌握ELISA試劑盒的選購與運用方面的知識更為重要。

一、ELISA試劑盒選購技巧

試劑盒的應用種屬、檢測樣本的品種：除試劑盒特別闡明外，一般不同種屬不能通用。常見待測樣本品種有：血清和血漿（不同抗凝劑），細胞上清，和細胞裂解液，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用；

試劑盒的檢測規模：也便是標曲規模，要留意待測樣本濃度是否落在標曲規模內，關于濃度很高的樣本，能夠*行預實驗摸索到比較好的稀釋倍數后再大量測定樣本。 

二：ELISA試劑盒中的稀釋線性及回收率：

a、稀釋線性一般指樣本稀釋線性，是將樣本梯度稀釋下來，看各稀釋梯度濃度是否成線性；參閱樣本稀釋線性能夠挑選樣本的較佳稀釋倍數；

b、稀釋線性也有做加標稀釋線性的情況，加標稀釋線性是將規范品參加樣本中測定參加的規范品濃度測定是否準確；同樣也是確定待測樣本稀釋倍數的參閱目標。一般線性和回收率的規模在80%-120%比較適宜； 

三：ELISA試劑盒的其它目標：

a、靈敏度：試劑盒能夠檢測到的樣本低濃度的才能，假如待檢目標含量很低，需求挑選高靈敏度的ELISA試劑盒；

b、板間和板內的變異系數（CV%）:反映板內和不同板之間是否均勻，CV%一般小于10% 比較好。

c、試劑盒的有效期：試劑盒的有效期一般是半年至一年，樣本預備時刻需求考慮到試劑盒的有效期。

四、ELISA試劑盒運用技巧

樣本的預備：盡量運用新鮮樣本，不運用有溶血，被細菌污染、標本保存時刻過長和標本凝固不全的樣本。ELISA檢測宜收集新鮮標本，如不能當即測定，5天之內應4℃保存，關于1周后檢測的樣本應低溫凍存；做好分裝，長期凍存的樣本避免重復凍融。

仔細閱讀闡明書，了解整個流程，引薦畫出扼要步驟圖；提前預備試劑，比方常見20X洗滌液是濃縮液，需求用超純水提前稀釋預備好。一般的檢測抗體和酶標二抗需求用對應的稀釋液稀釋至工作濃度。不同批次的試劑不要混用，查看各組分的有效期。

預包被的酶標板條和各試劑組份需求室溫平衡30 min以上，這樣做的意圖能使反響微孔內的溫度較快地達到所需溫度，預防后續實驗中因為孵育溫度或是時刻不夠充沛，而將一些弱陽性樣本不能檢出。

待測樣本加樣：待檢樣本過多時，建議分批操作；需求稀釋的樣本提前做好稀釋，留意選對適宜稀釋液；控制好加樣時刻，避免加樣費時過長造成差錯；留意加樣視點，筆直參加孔底，不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個移液頭，避免交叉污染。 

五：ELISA試劑盒溫育和洗板

溫育時刻和溫度一般依據試劑盒的闡明書進行挑選。溫育時能夠選用水浴或許濕盒孵育,避免“邊緣效應”。

①手工洗板時，決定時要筆直，避免交叉污染，用力不能過猛，避免抗原抗體復合物脫離；

②洗板機洗板時應常常查看沖洗頭是否通暢。

顯色：市售ELISA試劑盒中，一般是以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的顯色液，反響條件為37℃或室溫反響15～30 min。顯色反響需求避光。

讀數和數據剖析：終止后讀取結果盡量在15min內完成，讀取OD值時酶標儀需先預熱15～30 min再進行。數據剖析一般用四參數和直線擬合法，挑選哪種擬合方式，能夠依據標曲的相關系數（R2）來確定，R2一般需求大于0.99。

試劑盒性能

1.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。

2.  靈敏度：低檢測濃度小于1.0 U/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

2.   嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。