上海琛藝實業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進(jìn)細(xì)胞上千株，其中人的已通過STR鑒定的有幾百株，歡迎各位選購。。。。。。

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產(chǎn)品名稱：SRA01/04-GFP人晶體上皮細(xì)胞-綠色標(biāo)記培養(yǎng)說明書

包裝：內(nèi)層無菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說明書
細(xì)胞來源：ATCC、sciencell、ICLC
貨期：1-2周
運輸方式：快遞運輸
售后：收到細(xì)胞后12天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題（如污染，死亡，快遞運輸?shù)仍颍r，應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報告并及時通知銷售人員，我們將盡快為您解決！

• SRA01/04-GFP人晶體上皮細(xì)胞-綠色標(biāo)記培養(yǎng)說明書
• 三、細(xì)胞生長條件：

• 組成：

• 細(xì)胞簡介：

四、注意事項：

1 收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2 瓶中運輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)

3 對于貼壁細(xì)胞，若大部分細(xì)胞漂浮，置于培養(yǎng)箱隔夜觀察，大部分漂浮細(xì)胞重新貼壁，表明細(xì)胞活力正常，繼續(xù)培養(yǎng)，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉；若大部分細(xì)胞仍然不貼壁，將漂浮的細(xì)胞離心收集，用臺盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力，并與本公司銷售人員及時聯(lián)系。

4 建議客戶收到細(xì)胞后不同倍鏡各拍幾張細(xì)胞的照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，如細(xì)胞狀態(tài)出現(xiàn)問題請于72h內(nèi)與本公司銷售聯(lián)系，以便于更好的幫您解決問題，超過時間我段，本公司則默認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好，不免費對后續(xù)細(xì)胞狀態(tài)問題進(jìn)行售后。

做細(xì)胞實驗的同學(xué)看過來。

選擇上海琛藝生物細(xì)胞有3個理由：

1、細(xì)胞狀態(tài)好，形態(tài)佳，易成活，是市面上比較好養(yǎng)的細(xì)胞之一;

2、物流迅速，復(fù)蘇好后發(fā)貨，次日就能到;

3、使用我司推薦的進(jìn)口品牌血清進(jìn)行培養(yǎng)實驗，效果更佳。

細(xì)胞保種心得：

首先，細(xì)胞采購的運輸形式一般分為兩種，一種是直接寄送凍存細(xì)胞，一種是復(fù)蘇后寄送活細(xì)胞。前者是由液氮中取出細(xì)胞凍存管，采用干冰運輸；后者是將細(xì)胞復(fù)蘇至T-25培養(yǎng)瓶中，采用常溫運輸。兩者各有優(yōu)缺點，種方式的優(yōu)點是可以長途運輸，因為細(xì)胞在干冰中相對穩(wěn)定，一般可以保證數(shù)周之內(nèi)不影響細(xì)胞活性，但缺點是運輸成本高，且細(xì)胞復(fù)蘇是很復(fù)雜的過程，如果細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳，則很難界定是來源的問題還是復(fù)蘇操作的問題；而第二種方式的優(yōu)點是細(xì)胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細(xì)胞狀態(tài)，并且對運輸?shù)囊笙鄬^低，缺點則是只適合短途運輸，因為即便運輸時培養(yǎng)基中不添加血清，細(xì)胞還是會不斷增殖，當(dāng)細(xì)胞長滿后，細(xì)胞的狀態(tài)會隨時間的增加而不斷變差。綜上，如果是從國外大型細(xì)胞庫采購，一般采用種方法，既能適應(yīng)長途運輸，且大型細(xì)胞庫的凍存細(xì)胞質(zhì)量普遍較好，在良好的操作下復(fù)蘇成活率很高；如果是從國內(nèi)細(xì)胞庫采購，則一般采用第二種方法，方便收到細(xì)胞時能較好掌握細(xì)胞狀態(tài)，并且降低運輸成本。

原代細(xì)胞的傳代與復(fù)蘇的流程

一、實驗前準(zhǔn)備工作：

1、培養(yǎng)瓶的包被：包被液如多聚賴氨酸（PLL，ScienCell品牌）或纖維粘連蛋白（BPF，ScienCell品牌），以無菌水稀釋至2 ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。37度孵箱1小時或4度過夜，從包被好的培養(yǎng)瓶中回收多聚賴氨酸，并用無菌水洗滌培養(yǎng)瓶2遍。包被好的培養(yǎng)瓶不要放置超過24小時，其中的包被液可吸出重復(fù)使用2-3次，注意不要污染。

2、*培養(yǎng)基的配置：以內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基（ECM，ScienCell品牌）為例，把配套的胎牛血清（FBS，ScienCell品牌）、生長因子（ECGS，ScienCell品牌）和雙抗（P/S，ScienCell品牌）加入基礎(chǔ)培養(yǎng)液（ECM，ScienCell品牌）中。重新貼好標(biāo)簽，并混勻培養(yǎng)基。

二、原代細(xì)胞復(fù)蘇方法：

1、從液氮中取出原代細(xì)胞冷凍管，迅速投入37～38 ℃水浴中，其間可以輕輕轉(zhuǎn)動細(xì)胞，加快融化速度，大約需要1分鐘時間。

2、5分鐘內(nèi)用培養(yǎng)基稀釋至原體積的10倍以上，加入培養(yǎng)瓶中，再用1ml培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞凍存管，保證細(xì)胞都被加入培養(yǎng)瓶中，靜置于孵箱，12-16小時后更換培養(yǎng)基（除去DMSO）。以后每2天換一次液，保證細(xì)胞狀態(tài)良好。

三、原代細(xì)胞傳代方法：酶消化法

當(dāng)細(xì)胞生長至70-80%左右可以傳代，傳代比例以1:2或1:3為佳。具體方法如下：

1、棄去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，用PBS洗滌培養(yǎng)瓶2遍，加入0.25%的胰酶消化液（Trypsin-EDTA，ScienCell品牌，貨號0103），以消化液能覆蓋整個瓶底為準(zhǔn)。37度孵育4分鐘左右，輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)面，顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，直到80%細(xì)胞呈現(xiàn)圓形。

2、細(xì)胞消化好后，加入胰酶中和液（TNS，ScienCell品牌，貨號0113），并輕輕搖動培養(yǎng)瓶，形成細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞和培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm離心5分鐘。

3、棄去上清液，以1-2ml新鮮培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并吹打均勻，接種于包被好的新培養(yǎng)瓶中，瓶中已有10ml左右的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2天更換培養(yǎng)基。