細胞培養常見問題和解決方法

細胞培養技術是指在動植物體外生長,并不再形成組織。培養物一般為細胞群,也可以是單個細胞,近年來,其已經成為很多生物制品的主要材料,并廣泛應用于醫學病理研究,本文針對細胞培養存在的一些常見問題進行分析研究并提出相應防控措施,現總結如下：

問題1：培養液pH值變化太快

可能原因：

(1)CO2張力不對

(2)培養瓶蓋擰得太緊

(3)NaHCO3緩沖系統緩沖力不足

(4)培養液中鹽濃度不正確

(5)細菌、酵母或真菌污染

建議解決方法：

(1)按培養液中NaHCO3濃度增加或減少培養箱內CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度為5%到10%。

(2)松開瓶蓋1/4圈。

(3)改用不依賴CO2培養液。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。

(4)在CO2培養環境中改用基于Earle′s鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks鹽配制的培養液。

(5)丟棄培養物，或用抗生素除菌。

問題2：培養液出現沉淀，但pH值不變

可能原因：

(1)洗滌劑清洗后殘留有磷酸鹽，將培養基成分沉淀下來

(2)冰凍保存培養液

建議解決方法：

(1)用去離子水反復沖洗玻璃器皿，然后滅菌。

(2)將培養液加熱到37℃，搖動使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養液。

問題3：培養液出現沉淀，同時pH發生變化

可能原因：

細菌或真菌污染

建議解決方法：

丟棄培養物，或用抗生素除菌。

琛藝細胞所需要的血清操作：

※血清是否需要做滅活處理？

    這取決于您的應用。

    滅活過程中，會導致血清中某些成分被破壞，如氨基酸，維生素，生長因子等。所以只有在您的實驗對血清有特殊要求時，才會考慮對血清進行滅活處理。如您的實驗對血清中的某種組分敏感，需要去除該組分。好常見的情況是需要去除血清中的補體蛋白，因為補體在機體中參與細胞殺傷，巨噬細胞和淋巴細胞活化，肥大細胞和血小板組胺釋放，平滑肌收縮等過程，所以一般在免疫學相關研究中及肌細胞和干細胞的培養過程中需要對血清進行滅活處理。

※如何進行血清滅活處理？

    血清請先按上述“血清應如何融解”中的操作步驟融化和混勻，熱滅活時請將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質的影響，一次滅活的血清體積不宜過大。好好準備同樣的容器裝相等體積的水（與血清相同溫度），滅活時將裝有血清和水的容器同時放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計，加熱過程中不時輕輕旋轉混勻血清，當溫度計顯示達到56℃左右，開始計時。56 ℃水浴后，建議馬上轉移到冰上降溫。

※為什么需要對血清進行gamma射線輻照？

    gamma 射線輻照的目的是滅活血清中的病毒，一般情況下，25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。

※如何應對血清的批間差？

    琛藝銷售的胎牛血清產品通過嚴格的質控盡可能縮小批間差，但由于血清本身的特點和來源，無法*避免批間差。客戶可以通過做預測試等方式，選擇可滿足要求的血清批次。