為何免疫組化染色時必須*抑制內源性過氧化物酶的活性,才能降低背景的染色?
在各種組織中都含有很多的內源性過氧化物酶,尤其在紅細胞,中性粒細胞,單核細胞嗜酸性細胞,出血的組織壞死的組織等等。含有這種酶的各細胞和組織如果在染色前不對其進行處理和抑制,它們將會在DAB底物的顯色時,與HRP一樣催化底樣,使之顯色,使之生成與陽性物一樣的黃棕色,造成混亂。為止,在免疫組化染色前,都必須對內源性過氧化物酶進行抑制。當然,對它們進行*的消除是不行的,因為抑制太厲害,對抗原也會有相同的抑制作用。氫在抑制內源性過氧化物酶時,也要注意對抗原的保護抑制也只能對它們中的大部分在DAB顯色后,顯示出淡,這就足以與真正陽性物的區別。抑制劑常用的是0.3%的H2O2,也可將其稱為1%H2O2,因為市售的H2O2的濃度為30%,按其凈含量則為0.3%,如果按其溶液的用量則為1%。
關于H2O2的使用,有的使用是單純的H2O2稀釋溶,有的使用是H2O2甲醇混合物。根據實驗,認為H2O2甲醇較適合于大多數的情況,因為除了H2O2外,甲醇對各種酶,都有鈍化的作用,因此H2O2甲醇的雙重作用效果較好。研域等認為在多數情況中,用甲醇H2O2已經獲得令人滿意的結果。
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