聽說同學們的養的細胞常常因為各種原因一再受損或者死亡，今天小秋拿出畢生功力，為大家講述細胞培養中那些你可能忽略的小細節

細胞的營養來源

針對大多數腫瘤細胞，營養配方一般為：90%合成培養基(DMEM、RPMI1640、MEM等)和10%胎牛血清(FBS);為了防止污染，可以加1%雙抗!

常見問題解答：

Q：針對不同細胞，細胞培養基配方一樣嗎?如何獲知呢?

A：不同細胞的培養基是不同的。在小秋家購買的細胞，針對不同細胞株，會有詳細介紹，包括生長的狀態圖、培養基的類型等。

Q：培養基為什么一般都是偏紅色?

A：因為培養基加了酚紅來顯示顏色，指示pH范圍為6-8，顏色會由黃變為紫紅。這是為了我們能更直觀觀察培養液的變化，如變黃，則代表偏酸，偏堿性了就顯示偏紫色。一般來說，細胞吸收營養后，變黃后就暗示我們要換培養基啦!所以密切觀察很重要哦!

Q：大多數細胞系可以在不止一種培養基中生長，那可以替換嗎?

A：不建議更換的培養基，因為當培養基改變時，細胞的性質可能也會變化。

Q：若是細胞生長緩慢，是否可以增加血清比例?

A：可以!

細胞的生長環境舒適無菌的環境是細胞健康成長的基礎。如下圖為培養細胞的器皿，包括形狀、規格、用途多樣的培養瓶、培養皿及培養板。終住進37℃，5%CO2的恒溫培養箱。常見問題解答：

Q：細胞培養板規格不一，如何正確選用?
A：根據不同規格的細胞培養皿/板容量及用途，如流式一般用 6 孔，爬片一般用 24 孔，MTT 一般用 96 孔等。

Q：細胞培養皿和培養瓶區別?
A：就細胞培養狀態來說，培養瓶和培養皿沒有太大區別，主要在于安全系數(培養瓶>培養皿)、培養細胞數量(大培養瓶>培養皿)。但是培養瓶成本也會相對較高，因此無特殊要求，一般選擇培養皿即可。

細胞的復蘇與凍存
細胞復蘇：指將凍存的細胞解凍之后重新培養，細胞恢復生長的過程。復蘇過程如下圖所示：

常見問題解答：Q：為什么細胞復蘇后，很多難以貼壁?
A：忽略培養基的問題，主要考慮細胞凍存時狀態差或者復蘇時動作太慢導致細胞死亡。切記重要的融化速度要快，可不時搖動冷凍管，使之盡快通過易受損的溫度段(-5～0℃)。Q：為什么細胞貼壁了，卻長不起來?
A：此時需要考慮的是細胞密度問題，一些細胞傾向于維持一定的密度，若復蘇的細胞生長緩慢，可將細胞轉移到較小的培養瓶/皿中培養。

細胞凍存：將細胞放在低溫環境(-70℃~-196℃)，細胞內的代謝降低，可大限度的保存細胞活力，以便長期儲存。

常見問題解答：
Q：目前細胞凍存液多采用的什么配方?

A：目前細胞凍存液的配方有很多種，如培養基：血清：DMSO=7:2:1或8：1：1或5：4：1，或直接用血清：DMSO=9:1。 這里小秋推薦使用HAKATA無血清細胞凍存液，無需程序降溫，細胞存活率和活力高達90%-98%，適用于干細胞凍存及無血清培養細胞。

Q：若沒有細胞凍存盒，我們該怎么辦?

A：可先將凍存管放入4℃冰箱中10min，再移至-20℃冰箱30min，-80℃冰箱2h或過夜，后放入液氮罐內。為了節約時間，還可直接在凍存盒外包裹一團棉花，用棉花代替凍存盒緩慢降溫的特點，將細胞轉移至-80℃冰箱過夜，再轉移至液氮保存。

Q：細胞凍存時對細胞量有要求嗎?

A：細胞復蘇時會有一定的細胞死亡，因此細胞的濃度應足夠高，起始濃度106—107個/ml/管;

今天的內容就到這里了，細胞培養中的細節可馬虎不得，希望大家可以結合這些小技巧，將細胞養的更漂亮！

按照慣例，文末是時候放大招了：

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好了各位同學們，

為了能讓你們畢業，小秋也是費盡了心思，

但我也只能幫你們到這里了，

至于能不能畢業，就靠你們自己了...

你們懂我意思吧？