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胎牛血清使用中,您可能遇到的問題.......

來源:生物試劑銷售中心   2018年12月10日 15:28  

   上海試劑銷售國內胎牛血清服務商,我們不生產血清,只是血清的搬運工!涉及到的血清品牌:SERANA、GIBCO、Hyclone、BI、Bovogen、Gemini、美國NTC、biowest、PAN、SIGMA、康寧、PAA……涉及到血清分類:南美源、北美源、澳洲源、超低Igg、透析型、活性炭處理、高脂、低脂型胎牛血清等,另外還有無外泌體血清、科研用人混合血清、人AB血清、馬血清、小牛血清、驢血清、雞血清、兔血清、大鼠血清等,購買,進口胎牛血清,請聯系上海生物試劑銷售中心張昕!

1、如何選擇適合的血清?

國內一致認為HYCLONE的血清是很好的,但是根據我在北美的經歷,國外一般認為GIBCOHYCLONE好,所以并不是價格決定質量,但是總的來說這兩種價格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細胞,國產的就夠用了。此外,由于國內HYCLONEGIBCO并沒有生產線,我們只能從代理商那里買,而代理商又魚龍混雜,所以買到假貨的可能性也很大。選擇我司代理品牌德國SERANABOVOGEN胎牛血清,無疑是*,質量穩定、性價比高,有優等級別、特級、碳吸附、透析型、超低IGg,滿足實驗不同需求。

2 如何儲存和解凍血清不會使血清品質受損?

將血清從冷凍箱取出后,先置于28使之融解,然后在室溫下使之全融。

但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。

長時間儲存在2-8時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。

因此,推薦在-20以下儲存血清,并避免反復凍融若存放于4時,請勿超過1個月。

若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。

3、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響品質。

如要除去沉淀,離心(400g1-2分鐘)或讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一無菌瓶中(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37就會再溶解。

所以,使用時搖動并加熱血清至37,沉淀會自然消失。

4 如何避免血清中產生沉淀?

如下操作可避免沉淀的產生:

(1) 解凍血清時,請隨一邊解凍,一邊搖勻,使溫度及成分均一,減少沉淀產生。

(2) 血清分裝凍存時,規則搖均(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。

(3) 勿直接由-20直接至37解凍,因溫度改變太大,易使蛋白質凝結而發生沉淀。

(4) 勿將血清置于37太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清品質。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,無須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守5630分鐘的原則,并且一邊熱滅火,一邊搖勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

5 培養基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?

一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內使用它。

因為抗生素和血清中的一些成分在解凍后就開始降解。

6、為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。

在免疫學研究,培養ES細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。

7、細胞培養中出現黑點是污染嗎?如何處理?

一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養基是否混濁。

然后,在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否游動。

如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細胞,生長狀態良好,與黑點出現前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現可能與以下幾種情況有關:

(1) 細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;

(2) 血清質量不好,反復凍融的結果;

(3) 配制培養基的pH值偏高,不宜細胞生長;

(4) 配制培養基的水質、容器不合格。可用離心、過濾的方法去除這些黑點;

(5) 培養原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。

8、有必要做熱滅活嗎?

熱滅活血清對大多數的細胞而言是不需要的。

經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。

而經熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是小黑點,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間,更確保血清的質量!

9 細胞培養中如何防止黑點生成?

(1) 盡可能地減少血清凍融次數。

(2) 培養基無需37水浴。

(3) 培養基保持很好PH7.0- 7.2

(4) 嚴格控制配制培養基的水質,容器定期刷洗。

(5) 掌握細胞傳代的很好時機,細胞切勿生長過老。

10、小牛血清和胎牛血清有何區別與注意事項?

來源不同:胎牛血清(Fetal Bovine SerumFBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serumCS)采自出生1014 天的小牛。

各成分占比不同:兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細胞必需胎牛血清才能生長,而有些細胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%

血清保存和使用須注意:血清應保存在-5-20,若存放在4不可超過一個月。解凍血清時 ,應先將血清至于2-8,并經常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,不可將冷凍的血清直接放入37水浴或者溫箱中,如放在37解凍,顏色加深,粘稠度也會增加,血清在解凍和熱滅活后,應按用量分裝并于-20保存,避免反復凍融。

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