Invitrogen脂質體2000 （11668-027）使用說明

產品名稱：脂質體2000

貨號：11668-027

規格：0.75ml

脂質體2000

Invitrogen脂質體2000 （11668-027）描述：

Lipofectamine® 2000轉染試劑是一種多用途轉染試劑，可在各種貼壁和懸浮細胞系中提供轉染。研究人員可使用Lipofectamine® 2000試劑進行基于siRNA和shRNA的基因敲除實驗及基因表達研究。Lipofectamine® 2000是Life Technologies提供的用于siRNA和質粒DNA共轉染的試劑。

采用Lipofectamine® 2000試劑，您可以實現：

• 在各種細胞系中具有的轉染效率和高重組蛋白表達水平 (表1)

• 出眾的siRNA和質粒DNA共轉染性能

• 在血清存在時亦具有可靠的轉染效率 – 轉染后無需更換培養基

• 適用于高通量應用的可靠性能

• 建立穩定細胞系的*的選擇

I Invitrogen脂質體2000 （11668-027）是廣大老師所熟知的轉染試劑，其特點：轉染步驟快速簡便。以它為例，我們介紹一下脂質體轉染試劑的操作流程、注意事項等。

一、操作流程

事實上Lipofectamine系列產品操作流程都是又快又簡單：稀釋DNA以及Lipofectamine 2000，混合2種稀釋液保溫20分鐘，加入培養細胞中孵育24－96小時檢測結果。下面是Invitrogen提供的詳細流程和注意事項。

1、轉染前一天，胰酶消化細胞并計數，細胞鋪板，使其在轉染日密度為90%。細胞鋪板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生長的培養基中。

2、對于每孔細胞，使用50μl無血清培養基（如OPTI-MEMⅠ培養基）稀釋0.8μg-1.0μg DNA。

3、對于每孔細胞，使用50μl OPTI-MEMⅠ培養基稀釋1μl-3μl LIPOFECTAMINE 2000試劑。Lipofectamine 2000稀釋后保溫5分鐘（在30分鐘內同稀釋的DNA混合。保溫時間過長會降低活性。） 注意：即使Lipofectamine 2000使用OPTI-MEMⅠ稀釋，細胞也可以使用D-MEM培養。如果D-MEM做為Lipofectamine 2000的稀釋液，必須在5分鐘內同稀釋的DNA混合。

4、混合稀釋的DNA（第2步）和稀釋的Lipofectamine 2000（第3步）。在室溫保溫20分鐘。 注意：溶液可能會混濁，但不會影響轉染。復合物可以在室溫保持6小時穩定。

5、直接將復合物加入到每孔中，搖動培養板，輕輕混勻。注意：如果在無血清條件下轉染，使用含血清的正常生長培養基進行細胞鋪板。在加入復合物前移去生長培養基，替換為0.5ml無血清培養基。

6、在37℃，5％的CO2中保溫24-48小時，無須去掉復合物或更換培養基或者在4-5小時后更換生長培養基也不會降低轉染活性。

7、在細胞中加入復合物24-72小時后，分析細胞抽提物或進行原位細胞染色，檢測報告基因活性。這依賴于細胞類型和啟動子活性。對穩定表達，在開始轉染一天后將細胞傳代至新鮮培養基中，兩天后加入篩選抗生素。進行穩定表達需要數天或數周。

8、對于96孔板培養，不再需要提前一天進行細胞鋪板，而可以直接在平板中制備復合物，然后將細胞懸浮液加入到復合物就可以了，這樣進一步減少了轉染時間。這種改進步驟已經過293-H，293-F，COS-7L和CHO細胞的試驗，同傳統方法相比活性稍低?？旖莸牟襟E和蛋白表達細胞系的轉染使得Lipofectamine 2000非常適用于96孔板的高通量轉染，比如cDNA文庫的篩選和蛋白瞬時表達。

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