ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結合的機會，只有zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個逐漸平衡的進程，因而需經分散才能到達反響的結尾。在其后參加的酶符號抗體與固相抗原的結合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時刻的溫育。在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標本和加酶結合物后。
進口elisa試劑盒注意事項：
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間能控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。