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輸尿管內置管建立兔單側輸尿管梗阻腎小管間質纖維化模型

來源:上海申知心生物科技有限公司   2018年09月29日 17:20  

輸尿管內置管建立兔單側輸尿管梗阻腎小管間質纖維化模型

(1)復制方法  體重2~3kg新西蘭兔,經靜脈按30mg/kg體重的劑量注射戊丨巴丨比丨妥丨鈉麻醉,動物仰臥固定于手術臺上,腹部皮膚常規消毒、去毛。作臍下腹直肌外側旁直切口,切開腹外斜肌腱膜,暴露腹內斜肌,分開腹橫肌,向內側推開腹膜,鈍性分離腹膜,在髂血管前找到輸尿管,游離輸尿管,用艾利斯(Allis)鉗固定輸尿管,用剪刀剪開輸尿管1/3管徑(此處距離腎盂4~5cm),將F2導管向輸尿管近端逆行插入2~3cm,可見到尿液經導管流出,用1號絲線結扎輸尿管遠端,固定輸尿管及導管,將導管遠端結扎閉合,埋藏于皮下,以備收集標本用。按120~150mg/kg體重劑量,分別在預定時間經靜脈給模型兔注射3%的菊糖溶液。然后取梗阻側的腎盂尿,無梗阻側的腎盂尿,血液標本,作菊糖濃度,轉化生長因子β1(TGF-β1)濃度測定;并處死動物,取腎臟標本,經10%甲醛固定,作常規石蠟組織切片,HE染色,光鏡下觀察。

(2)模型特點  術后模型動物梗阻側尿液中菊糖濃度明顯低于正常值;而梗阻側尿液中TGF-β1濃度則明顯高于正常側,表明梗阻側腎臟功能受損害,且分泌TGF-β1顯著增加。模型動物肉眼大體觀察梗阻側腎臟體積較正常增大,腎盂、腎盞擴大,輸尿管增粗,管腔擴大。鏡下病理組織學觀察顯示,梗阻側腎臟腎皮質部分間質充血、水腫,同時伴有數量不等的炎癥細胞浸潤;腎髓質間質充血、水腫,并可見不同程度炎癥細胞浸潤;腎小球及腎小管組織形態基本正常,無明顯改變。本模型梗阻早期,腎臟病變主要以腎間質炎癥、充血、水腫為主;中后期則可出現腎臟間質纖維化,腎功能損害,腎小球逐漸萎縮,被薄層纖維組織替代。模型動物梗阻側腎臟尿液菊糖濃度變化可準確反映腎小球濾過率降低的病理變化;腎臟組織纖維化形成過程中TGF-β1可持續過度表達。本模型方法簡單,實用性強,易于標本反復收集,可用于動態研究。本模型制作過程中,導管插入長度應控制在2~3cm之間,避免因插入過長造成腎盂黏膜膜及腎實質損傷,導致腎盂內積血或感染,而使模型制作失敗。

(3)比較醫學  單側輸尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)腎損傷模型以進行性腎小管間質纖維化為其主要特征,并伴有散在腎小球病變,但無高血壓和脂質代謝異常。臨床上單側輸尿管梗阻可由許多疾病引起,隨著病程的不斷發展,可引起不同程度的腎功能損害,直至腎功能喪失。腎小球及腎小管間質纖維化,其直接原因是多種細胞外基質(ECM)成分的積聚,如:纖黏蛋白(FN),Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原,硫酸表皮素蛋白多糖(Biglycan)等多種蛋白多糖的積聚。一系列生長因子與細胞因子的改變與這些ECM成分的合成及代謝的調節密切相關,轉化生長因子β1(TGF-β1)是其中重要的細胞因子之一。TGF-β1通過受體信號轉導促進細胞合成膠原蛋白、纖維蛋白、層蛋白以及蛋白多糖等,調節組織正常的損傷修復,其過量生成則與慢性纖維化有關。本模型通過改進傳統的單一性輸尿管結扎的方法,采用輸尿管內置管制備單側輸尿管梗阻,同樣可獲得與傳統手術方法制備的相同的梗阻動物模型,且腎功能損害、纖維化病變特征典型,并證實模型動物可出現菊糖濃度降低及 TGF-β1濃度升高,可用于腎小管間質纖維化發病機制、藥物治療方面的動態、重復性研究。

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