一、實驗動物選擇與術前準備

1. 品系選擇

• C57BL/6小鼠：基因同源性高，耐受性強，廣泛用于基因編輯研究（如CRISPR-Cas9）。

• 轉基因小鼠（如CX3CR1-GFP）：用于追蹤小膠質細胞動態變化，研究免疫調控機制。

• 年齡與性別：

• 年齡：8-12周齡（性成熟期，骨生長板閉合）；

• 性別：雄性為主（避免雌激素周期干擾），部分研究需雌性以模擬性別差異效應。

2. 術前準備

• 適應性飼養：SPF環境中適應7天，控制光照周期（12h/12h）與標準飼料。

• 麻醉方案：

  麻醉劑	濃度與劑量	適用場景
  異氟烷	4%誘導，1-2%維持（混合30% O?/70% N?）	常規手術，術后恢復快
  三溴乙醇	1.25%腹腔注射（20μL/g）	短時操作，需注意肝毒性

二、造模方法分類與操作流程

1. 挫傷型模型（主流方法）

改良Allen's法：

1. 椎板暴露：T9-T11節段背部正中切口，分離椎旁肌肉，咬除T10椎板暴露脊髓。

2. 打擊參數：

• 氣壓打擊：使用PSI-IH打擊器，設定壓力0.7N，打擊深度1.0mm，停留時間0.1s。

• 重物墜擊：10g砝碼從8.3cm高度墜落，通過套管間接撞擊脊髓。

3. 判定標準：

• 即刻反應：雙后肢抽動、尾巴甩動；

• 術后蘇醒：后肢遲緩性癱瘓，BMS評分≤2分（滿分9分）。

智能自動化系統（G smart SCI system）：

• 優勢：激光測距+自動化平臺，減少人為誤差，實現打擊參數（速度、深度）精準控制。

• 應用：可生成輕、中、重度損傷模型，用于梯度修復研究。

2. 壓迫型模型

• 鉗夾法：

• 使用動脈瘤夾（壓力50g，持續30s）夾閉T10脊髓，模擬臨床椎管狹窄或腫瘤壓迫。

• 病理特征：軸突斷裂、星形膠質細胞增生，MBP表達下降>60%。

• 氣囊壓迫：植入微型氣囊，逐步充氣至壓力20mmHg，持續5分鐘。

3. 橫斷型模型

• wan全橫斷：顯微剪刀切斷T10節段脊髓，用于研究神經再生屏障。

• 部分橫斷：單側半切（保留50%脊髓完整性），評估不對稱運動功能恢復。

4. 化學損傷模型

• 谷氨酸注射：T10硬膜外注射1μL谷氨酸（10mM），誘導興奮性毒性損傷。

• 脂多糖（LPS）模型：局部注射LPS（1μg/μL）模擬神經炎癥，IL-6升高>5倍。

三、術后管理與并發癥防控

1. 基礎護理

• 鎮痛：布洛芬緩釋片（10mg/kg，bid×3天）或局部冷敷。

• 抗感染：頭孢呋辛鈉（90mg/kg，qd×7天）。

• 膀胱管理：每日人工按摩排尿2-4次，直至自主排尿恢復（約7-14天）。

2. 生存質量監測

• 體重閾值：術后體重下降>15%或活動量減少>50%需終止實驗。

• 營養支持：高熱量軟食（如凝膠飼料）預防營養不良。

四、模型驗證與評估體系

1. 行為學評估

2. 影像學分析

• 微型MRI：T2加權像顯示損傷中心高信號，T2 mapping值升高>30%。

• Micro-CT：量化骨贅形成（BV/TV>5%提示繼發性骨關節炎）。

3. 組織病理學

4. 分子生物學檢測

• 炎癥因子譜：ELISA檢測TNF-α (>80pg/mL)、IL-6 (>120pg/mL)。

• 氧化應激：比色法測定MDA (>4nmol/mg蛋白)、SOD活性下降>30%。

五、創新方向與技術突破

1. 基因編輯與細胞治療：

• CRISPR-Cas9：敲除Nogo-A基因促進軸突再生，運動功能恢復率提升40%。

• 小膠質細胞移植：Mr BMT-X Ray方案替換效率達84.8%，優于傳統方法。

2. 智能監測系統：

• 植入式柔性傳感器：實時監測損傷區pH、IL-6濃度（精度±5pg/mL）。

• AI預后模型：基于Micro-CT圖像的3D ResNet算法預測修復潛力（AUC=0.93）。

3. 類器官與生物材料：

• 脊髓類器官芯片：iPSC分化的神經元與膠質細胞共培養，模擬損傷微環境。

• 4D打印支架：溫敏性GelMA水凝膠負載BDNF，孔隙率85%促進血管化。

六、倫理與標準化挑戰

1. 動物福利：

• 推行“3R原則”（替代、減少、優化），推廣離體脊髓切片模型減少活體使用。

• 國際共識指標：制定《ARRIVE-SCI指南》，統一手術參數與評估標準。

2. 數據可比性：

• 第三方驗證：關鍵指標（如BMS評分、GFAP表達）需跨實驗室重復（CV<10%）。