人ELISA試劑盒樣品制備:
1、研磨樣品,用20目篩過(guò)濾,不馬上使用的樣品要放在冰箱儲(chǔ)存。
2、在燒杯中稱量50g樣品和5g NaCl。
3、并加入100ml 80%的甲醇水溶液,密封放置。
4、劇烈震蕩1分鐘。
5、用Whatman GF/A濾紙過(guò)濾至少10ml樣品處理液,然后轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的干凈的容器中。
6、用20ml的水稀釋5ml的提取液。
作步驟:
注意:標(biāo)準(zhǔn)和樣品做平行可以增加精密度和準(zhǔn)確度
1.使用前將試劑盒和樣品處理液提前從冰箱中拿出來(lái)使其達(dá)到室溫。
2.從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條,放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3.每個(gè)測(cè)試孔都加入50 μL酶結(jié)合物
4.在對(duì)應(yīng)的微孔中加入50μL的標(biāo)準(zhǔn)和樣品,確保吸頭要干凈。
5.每個(gè)測(cè)試孔都加入50 μL抗體溶液
6.孵育10分鐘
7.孵育完成后,將微孔中的溶液倒入水槽中,用自來(lái)水加滿微孔然后倒掉,重復(fù)四次,總共五次洗板。
8.后一次洗板后要拍板,去掉殘留的洗液。
9.每個(gè)測(cè)試孔加入100μL底物。
10.孵育10分鐘
11.每個(gè)測(cè)試孔加入100μL終止液。
12.450nm 下讀取每個(gè)孔的吸光度值(OD)。
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