ELISA試劑盒檢測(cè)試劑盒操作過(guò)程
1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取滿足數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，別離設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記載各孔方位，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中參與標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本孔中先參與待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對(duì)照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板）。
6、加酶標(biāo)工作液：每孔參與酶標(biāo)工作液50μL，空白對(duì)照孔不加。
7、溫育：重復(fù)4的操作。
8、洗板：重復(fù)5的操作。
9、顯色：每孔先參與顯色劑A 液50μL，再參與顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、中止：取出酶標(biāo)板，每孔加中止液50μL，中止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在中止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（OD值）。
12、核算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，核算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上核算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也能夠運(yùn)用各種應(yīng)用軟件來(lái)核算。畢竟?jié)舛葹閷?shí)踐測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
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