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CCK-8實(shí)驗(yàn)方法

來源:和元李記(上海)生物技術(shù)有限公司   2018年03月15日 11:28  

操作方法:

1. 在96孔板中配制100 μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí) (在37℃,5% CO2的條件下)。

2. 向培養(yǎng)板加入10 μl不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。如果測(cè)定細(xì)胞活性,則不需要2-3步驟,直接從第四步操作。

3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (例如: 6,  12, 24或48小時(shí))。

4. 向每孔加入10 μl CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響O.D值的讀數(shù))。

5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。

6. 用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光度。

注意事項(xiàng):

1)CCK-8試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化反應(yīng),如果待檢測(cè)體系中有較多還原劑(或抗氧化劑)會(huì)造成背景O.D值升高,干擾檢測(cè)結(jié)果。如果實(shí)驗(yàn)中有還原劑,請(qǐng)檢查背景的O.D值,即測(cè)定、比較空白培養(yǎng)基加入藥物與不加藥物的培養(yǎng)基(含細(xì)胞)在加入CCK- 8試劑后的O.D值,如果空白O.D值明顯偏高,則說明有反應(yīng),應(yīng)設(shè)法去除或折算干擾因素。

2)如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng),培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化,應(yīng)洗滌細(xì)胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8檢測(cè)。細(xì)胞培養(yǎng)基酚紅不影響測(cè)定結(jié)果。

3)為使CCK-8試劑盒培養(yǎng)基充分混勻,減少CCK-8在移液器上的殘留,建議加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑,混勻后加樣。

4)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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