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大鼠ELISA試劑盒經(jīng)驗(yàn)技術(shù)也是很重要的,常見的技術(shù)指南

來源:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司   2017年11月29日 14:29  

大鼠ELISA試劑盒經(jīng)驗(yàn)技術(shù)也是很重要的,常見的技術(shù)指南:
1、選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì);若選擇兩個(gè)單抗,必須識(shí)別不同表位的抗體,從同一家公司選擇抗體對(duì)。
2、實(shí)驗(yàn)中為了確定信號(hào)和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體和檢測(cè)抗體在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。
3、標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,注意每批的細(xì)節(jié),在使用細(xì)胞因子前,瞬時(shí)離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子,根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
4、一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋。
5、為了優(yōu)化靈敏度,建議孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
6、若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
7、當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí),如血清,建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
實(shí)驗(yàn)原理:
   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)水平。用純化的大鼠核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB),再與HRP標(biāo)記的核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)的含量。
實(shí)驗(yàn)過程必知小知識(shí):
① 建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè),取平均值,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
② 若顯色過淺,可適當(dāng)延長底物溫育時(shí)。
③ 實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
④ 酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
⑤ 標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè),如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng),保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
⑥ 凍結(jié)標(biāo)本溶解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛混合,不要在混勻器上強(qiáng)烈震蕩。
⑦ 渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測(cè)。
⑧ 反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低,所以代測(cè)樣本如需保存作多次檢測(cè),宜少量分裝冰存。
大鼠ELISA試劑盒B細(xì)胞淋巴瘤-XL(Bcl-xl)ELISA試劑盒    ,英文名:    Bcl-xl ELISA Kit
B細(xì)胞連接蛋白(BLNK)ELISA試劑盒    ,英文名:    BLNK ELISA Kit
B細(xì)胞活化因子受體(BAFF-R)ELISA試劑盒    ,英文名:    BAFF-R ELISA Kit
B細(xì)胞活化因子(BAFF)ELISA試劑盒    ,英文名:    BAFF ELISA Kit
B細(xì)胞分化因子(BCDF)ELISA試劑盒    ,英文名:    BCDF ELISA Kit
B細(xì)胞κ輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(NFKBIE)ELISA試劑盒    ,英文名:    NFKBIE ELISA Kit
B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒    ,英文名:    BLC-1/CXCL13 ELISA Kit
B淋巴細(xì)胞抗原(CD20)ELISA試劑盒    ,英文名:    CD20 ELISA Kit
BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒    ,英文名:    Bid ELISA Kit
Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1)ELISA試劑盒    ,英文名:    BCL2L1 ELISA Kit
Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒    ,英文名:    BAX ELISA Kit
A組鏈球菌菌壁多糖抗體(ASP)ELISA試劑盒    ,英文名:    ASP ELISA Kit
A組鏈球菌多糖抗原(ASP Ag)ELISA試劑盒    ,英文名:    ASP Ag ELISA Kit
A激酶PRKA錨定蛋白12(Akap12)ELISA試劑盒    ,英文名:    Akap12 ELISA Kit
AT豐富結(jié)合域1A(ARID1A)ELISA試劑盒    ,英文名:    ARID1A ELISA Kit
ATP酶(ATP)ELISA試劑盒    ,英文名:    ATP ELISA Kit
Apelin12(AP12)ELISA試劑盒    ,英文名:    AP12 ELISA Kit
Apelin 36(AP36)ELISA試劑盒    ,英文名:    AP36 ELISA Kit
apelin 13(AP13)ELISA試劑盒    ,英文名:    AP13 ELISA Kit
apelin 12(AP12)ELISA試劑盒    ,英文名:    AP12 ELISA Kit
AP-5復(fù)合物β亞基(PP1030)ELISA試劑盒    ,英文名:    PP1030 ELISA Kit
Alpha-D 生育酚/維生素E(Alpha-D TPL)ELISA試劑盒    ,英文名:    Alpha-D TPL ELISA Kit
Agouti相關(guān)蛋白(AGRP)ELISA試劑盒    ,英文名:    AGRP ELISA Kit大鼠ELISA試劑盒

 

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