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亮發(fā)光桿菌的分離、培養(yǎng)

來源:上海一研生物科技有限公司   2017年09月14日 11:20  

亮發(fā)光桿菌實驗方法   
1、銅柱系統(tǒng)除氧
2、預還原培養(yǎng)基及稀釋液的制備
      制作預還原培養(yǎng)基及稀釋液時,先將配置好的培養(yǎng)基和稀釋液煮沸驅氧,而后用半定量加樣器趁熱分裝到螺口厭氧試管中,一般瓊脂培養(yǎng)基裝4.5~5.0mL,稀釋液裝9mL,并插入通N2氣的長針頭以排除O2。此時可以清楚的看到培養(yǎng)基內(nèi)加入的氧化還原指示劑—刃天青由藍到紅zui后變成無色,說明試管內(nèi)已成為無氧狀態(tài),然后蓋上螺口的丁烯膠塞及螺蓋,滅菌備用。
3、分離
(1)編號
      取五支無菌水試管,分別用記號筆標明10-1、10-2……10-5。
(2)稀釋
      在無菌條件下,用無菌注射器吸取1mL混合均勻的液體樣品,加入裝有預還原生理鹽水的厭氧試管中,用震蕩器將其混合均勻,制成10-1稀釋液。用無菌注射器吸取1mL10-1稀釋液至另一裝有9mL生理鹽水的厭氧試管中,制成10-2稀釋液。依此進行10倍系列稀釋,至10-7,制成不同樣品稀釋液。通常選10-5、10-6、10-7三個稀釋度進行滾管計數(shù)。
(3)滾管分離
1)滾管
      將無氧無菌的瓊脂培養(yǎng)基在沸水浴中溶化,置46-50℃恒溫的水浴中,待用,用無菌注射器吸取10-4、10-5、10-6三個稀釋度各0 .1mL,分別注入待用的試管中,然后將其平放于盛有冰水的瓷盤中迅速滾動,帶菌的溶化瓊脂在試管內(nèi)壁會即刻形成凝固層。
2)分離
      生成的亮發(fā)光桿菌落需挑取出來,鏡檢其形態(tài)及純度。如尚未獲得純培養(yǎng)物,需再次稀釋滾管,并再次挑取菌落,直至獲得純培養(yǎng)物為止。待挑取的單菌落預先在放大鏡下觀察確定,做好標記。然后將培養(yǎng)基試管固定于適當?shù)闹Ъ苌希蜷_試管膠塞,同時迅速將氣流適當、火焰滅過菌的氮氣長針頭插入管內(nèi)。同時,另一液體厭氧管去掉膠塞插入另一滅過菌的通氣針頭。將準備好的彎頭毛細管小心插入固體培養(yǎng)基內(nèi),找準待挑菌落,輕輕吸取,轉移至液體試管內(nèi),加塞。37℃培養(yǎng)。培養(yǎng)24h或待培養(yǎng)液混濁后檢查已分離培養(yǎng)物的純度。
鄰苯二甲suan丁芐酯-D4 標準品    純品型,有證書,10mg    CDEO-NF014-25mg    呋喃唑酮代謝物的衍生物2-NP-...    25mg    CDCT-C16168010
連*苯/1,2,3-*基苯    1000mg/L;1ml    CDGG-021128-02    1,2-二溴四氟乙烷(Hlon ...    2000mg/L;1ml    CDGG-020869-05
喹氧靈    1000mg/L;1ml    CDGG-031657-02    戊菌唑    1000mg/L;1ml    CDGG-031836-03
奎寧 標準品    純品型,有證書,0.1g    CDDM-M884100-25mg    楊梅素    25mg    CDCT-C16706900
可溶性淀粉    5g    CDGG-010408-08    蔗糖 標準品    25ml    CDCP-CARB-37-5g
糠醛    2000mg/L;2x0.6ml    CDGG-031049-01    呋喃    1000mg/L;1ml    CDGG-031264-02
亮發(fā)光桿菌

 

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