3D4/21細胞株復蘇失敗原因分析

生物試劑銷售中心細胞庫提供遺傳變異細胞系、正常組織來源細胞系、腫瘤細胞系、工程細胞系、干細胞系，涉及人類，大鼠、小鼠、鳥類、倉鼠、魚類、貓類、狗、牛、貂、豬、恒河猴、長鼻袋鼠等。

產(chǎn)品名稱：3D4/21細胞

中文名稱：豬肺泡巨噬細胞

種屬：豬

來源：肺泡巨噬細胞；SV40轉化；Landrace

培養(yǎng)條件：DMEM

生長狀態(tài)：貼壁

3D4/21細胞株復蘇失敗原因分析

細胞的凍存與復蘇

為了防止因污染或技術原因使長期培養(yǎng)功虧一簣，考慮到培養(yǎng)細胞因傳代而遲早會出現(xiàn)變異，有時因寄贈、交換和購買，培養(yǎng)細胞從一個實驗室轉運到另一個實驗室，*的策略是進行低溫保存。這對于維持一些特殊細胞株的遺傳特性極為重要。現(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(－70℃~－196℃)的特點。細胞深低溫保存的基本原理是：在－70℃以下時，細胞內(nèi)的酶活性均己停止，即代謝處于*停止狀態(tài)，故可以長期保存。細胞低溫保存的關鍵，在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi)，水晶呈針狀，極易招致細胞的嚴重損傷。

一、細胞的凍存：為避免污染造成的損失，zui小化連續(xù)細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉化，需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前，細胞應該特性化并檢查是否污染。

有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基，成分可能如下：

包含10％甘油的*培養(yǎng)基，

包含10％二甲基亞砜（DMSO）的*培養(yǎng)基，

50％ 細胞條件培養(yǎng)基和50％含有10％甘油的新鮮培養(yǎng)基，或

50％ 細胞條件培養(yǎng)基和50％含有10％二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。

對于無血清培養(yǎng)基，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：

50％ 細胞條件無血清培養(yǎng)基和50％包含有7.5％二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基，或

包含有7.5％二甲基亞砜和10％細胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。

3D4/21細胞株復蘇失敗原因分析

CEK  雞胚腎細胞          雞     胚腎         DMEM     貼壁

NCI-H1770       人非小細胞肺癌細胞     人     非小細胞肺癌；淋巴結轉移；男性     1640         懸浮

NCI-H1092       人小細胞肺癌細胞         人     非小細胞肺癌；骨髓轉移；男性         1640         貼壁

KYSE30     人食管鱗癌細胞     人     食管鱗癌；男性     EMEM      貼壁

Mv-4-11   人急性單核細胞白血病細胞         人     急性單核細胞白血病；男性         1640         懸浮

RPMI8226        人多發(fā)性骨髓瘤細胞     人     漿細胞骨髓瘤；男性     1640         懸浮

NALM-6   人急性B淋巴白血病細胞     人     急性B淋巴細胞白血病；男性     1640         懸浮

Nthy-ori3-1       人甲狀腺正常細胞         人     甲狀腺；SV40轉化；女性    F12K          貼壁

FHC  人正常結直腸粘膜細胞         人     胎兒；結腸；自發(fā)永生；男性     1640         貼壁

FLS   大鼠成纖維樣滑膜細胞         大鼠         滑膜         DMEM     貼壁

HFL  人成纖維樣滑膜細胞     人     滑膜         1640         貼壁

HLEB3      人晶狀體上皮細胞系     人     晶狀體；Ad12-SV40轉化；男性  DMEM     貼壁

HN13        人口腔鱗狀細胞癌細胞         人     舌鱗癌；女性         EMEM      貼壁

RLE-6TN   大鼠肺上皮Ⅱ型細胞     大鼠         肺；上皮細胞；Fischer 344  DMEM     貼壁

PA-TU-8988S    人胰腺癌細胞         人     胰腺癌；女性         DMEM     貼壁

HEEC        人正常食管上皮細胞     人     食管；上皮細胞     1640         貼壁

MES-SA    人子宮肉瘤細胞     人     子宮肉瘤；女性     McCoy’s    貼壁

MCFs        小鼠心肌成纖維細胞     小鼠         心肌；成纖維細胞         1640         貼壁

EHEB        人慢性B細胞白血病細胞     人     B細胞白血病；女性      1640         懸浮

SNK6         人NK/T細胞淋巴瘤細胞       人     NK/T細胞淋巴瘤；男性        1640         懸浮

PIG1          正常人皮膚黑色素細胞         人     皮膚；黑色素細胞；HPV16轉化；男性     1640         貼壁

hTERT-RPE1     人視網(wǎng)膜色素上皮細胞         人     視網(wǎng)膜色素上皮；hTERT永生；女性 DMEM     貼壁

ARPE-19/APRE-19    人視網(wǎng)膜色素上皮細胞         人     視網(wǎng)膜色素上皮；自發(fā)永生         DMEM     貼壁

HO8910PM      人卵巢癌細胞         人     卵巢癌；女性         1640         貼壁

IPI-2I         豬回腸上皮細胞  豬     腸；上皮細胞；SV40轉化    1640         貼壁

RT4-D6P2T       大鼠神經(jīng)雪旺氏細胞     大鼠         惡性神經(jīng)鞘瘤；BDIX     DMEM     貼壁

HUVEC     人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞         人     臍靜脈；內(nèi)皮細胞         DMEM     貼壁

HTR8-Svneo     人絨毛膜滋養(yǎng)層細胞     人     絨毛膜滋養(yǎng)層         1640         貼壁

KG-1a        人急性骨髓白血病細胞         人     急性髓系白血病；男性         IMDM      懸浮

OCI-AML3         人急性髓細胞性白血病細胞         人     急性髓系白血病；男性         IMDM+20%     懸浮

1、懸浮細胞

計數(shù)將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數(shù)生長期。以大約200～400g離心5分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到zui小體積，不要攪亂細胞。

以1×10⁷到5×10⁷細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細胞，或者以0.5×10⁷到1×10²⁷在無血清培養(yǎng)基中，再次懸浮細胞。

分裝進凍存管，將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中，5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。

細胞以1℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后轉移到液氮中貯存。

2、貼壁細胞

使用分離試劑從基層分離細胞，分離時盡可能溫和，使對細胞的損傷減少到zui小。

在*生長培養(yǎng)基中，再次懸浮分離細胞，確定有活力細胞數(shù)。

以大約200g離心5分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到zui小體積，不要攪亂細胞。

以5×10⁶到1×10⁶細胞/ml密度，在凍存液中懸浮細胞。

分裝進凍存管，將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中，5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。

細胞以1℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后轉移到液氮中貯存。

3D4/21細胞株復蘇失敗原因分析