EL4細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

產(chǎn)品名稱：EL4細(xì)胞

中文名稱：小鼠淋巴瘤細(xì)胞

種屬：小鼠

來(lái)源：淋巴瘤； C57BL/6N

培養(yǎng)條件：DMEM

生長(zhǎng)狀態(tài)：懸浮

2017年新學(xué)期，迎著朝陽(yáng)，放飛夢(mèng)想，久別重逢，相聚一堂，百尺竿頭，更進(jìn)一步，學(xué)無(wú)止境，自立自強(qiáng)，為國(guó)爭(zhēng)光，生物試劑銷售中心細(xì)胞庫(kù)為答謝各位莘莘學(xué)子的厚愛(ài)，在新學(xué)期開(kāi)學(xué)之際，將生物試劑銷售中心細(xì)胞庫(kù)1223株細(xì)胞特惠出售，更多活動(dòng)詳情，請(qǐng)致電市場(chǎng)部！

EL4細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

有的客戶在COS-1細(xì)胞復(fù)蘇傳代后發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞狀態(tài)不好，形態(tài)不佳，透光度亦不好，如果老師認(rèn)為復(fù)蘇過(guò)程沒(méi)問(wèn)題，那就核實(shí)下是否是從液氮拿出直接放入溫水，還有培養(yǎng)箱，二氧化碳濃度，培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%，看看能否幫助貼壁，當(dāng)然也需要考慮血清問(wèn)題，還有確信拿來(lái)的細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題。

有的老師認(rèn)為首先應(yīng)該懷疑凍存，實(shí)際上復(fù)蘇出問(wèn)題的可能非常小，因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單，而且死板。

1、確認(rèn)下凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，這是一般人所注意不到的，即使書上也不講這個(gè)問(wèn)題，但我們因?yàn)檫@個(gè)問(wèn)題就兩種肺癌細(xì)胞和一種肝癌細(xì)胞專門做過(guò)試驗(yàn)，這個(gè)是絕大部分人細(xì)胞復(fù)不活的一個(gè)原因。太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力，表現(xiàn)為先貼后死，原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序，不可逆轉(zhuǎn)的死亡。

2、老師的凍存液好不好，是什么，甘油還是DMSO，質(zhì)量非常重要，否則也會(huì)死亡。

3、老師的凍存液的量加的是不是太多，ATCC推薦是不超過(guò)7%，大于5%，太多也不好。

4、老師在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻，這個(gè)有一些影響，但不算太大。

5、老師的凍存是否按部就班，就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格，很多人容易忘卻這個(gè)事情，因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng)。

6、如果老師的細(xì)胞污染，你是否能很快看到。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。

7、老師的細(xì)胞在凍存前是否過(guò)密。

還有，我們是不贊成孵箱污染這個(gè)概念的，所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話，這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的，但這不代表孵箱污染，因?yàn)榉跸錈o(wú)論你如何處理都有大量的細(xì)菌，問(wèn)題在操作。我們的細(xì)胞房不換拖鞋，非常臟，別人的細(xì)胞都污染，很多細(xì)胞都污染到絕種，但我們的只污染一次（兩年內(nèi)只有兩瓶），那次是因?yàn)楫?dāng)初有某高校組織學(xué)生參觀我們細(xì)胞庫(kù)給動(dòng)過(guò)了，我們每次細(xì)胞擺放順序都是記住的。如果老師老懷疑孵箱污染，我們會(huì)認(rèn)為老師的復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)還需要進(jìn)一步熟練和積累經(jīng)驗(yàn)。

每次污染的原因都要盡可能的找，以后就不犯同樣的問(wèn)題，這個(gè)很重要，不能靠猜。

EL4細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

293AD   人胚腎細(xì)胞  人  胚腎；5型腺病毒轉(zhuǎn)化；女性   DMEM    貼壁   

T241    小鼠纖維肉瘤細(xì)胞    小鼠    纖維肉瘤    DMEM    貼壁   

RGM1    大鼠正常胃黏膜上皮細(xì)胞  大鼠    胃黏膜；上皮細(xì)胞；自發(fā)永生；Wistar  1640    貼壁   

BT  新生牛鼻甲細(xì)胞  牛  鼻甲；自發(fā)永生；Holstein    EMEM    貼壁   

USMC    大鼠血管平滑肌細(xì)胞  大鼠    血管平滑肌  DMEM    貼壁   

SBC-5   人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞    人  小細(xì)胞肺癌；胸腔積液轉(zhuǎn)移；男性  1640    貼壁   

D407    人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞    人  視網(wǎng)膜；色素上皮細(xì)胞；自發(fā)永生；男性    DMEM    貼壁   

ETCC-007    人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞    人  浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌；女性  DMEM    貼壁   

HLF-a  人肺鱗癌細(xì)胞    人  肺鱗癌；女性    1640    貼壁   

LK2 人肺鱗癌細(xì)胞    人  肺鱗癌；男性    1640    貼壁   

ESC 人表皮干細(xì)胞    人  表皮干細(xì)胞  DMEM    貼壁   

MASMC   小鼠氣道平滑肌細(xì)胞  小鼠    氣道平滑肌  DMEM    貼壁   

M109    小鼠肺癌細(xì)胞    小鼠    肺癌    DMEM    貼壁   

SK-GT-2 人胃癌細(xì)胞  人  胃底癌；男性    1640    貼壁   

MOLM-14 人急性髓系白血病細(xì)胞    人  急性髓系白血病；男性    IMDM    懸浮   

Kelly   人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞  人  神經(jīng)母細(xì)胞瘤；女性  DMEM    貼壁   

NCI-H441    人肺腺癌細(xì)胞    人  乳頭狀肺腺癌；男性  1640    貼壁   

COLO-16 人皮膚鱗癌細(xì)胞  人  皮膚鱗癌；女性  DMEM    貼壁   

HEL299  人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞    人  紅白細(xì)胞白血病  1640    懸浮   

SK-UT-1 人子宮平滑肌瘤細(xì)胞  人  子宮平滑肌瘤；女性  EMEM    貼壁   

NB1-RGB 人皮膚成纖維細(xì)胞    人  皮膚；成纖維細(xì)胞；男性  DMEM    貼壁   

S91 小鼠黑色素瘤細(xì)胞    小鼠    黑色素瘤；雄性；DBA 1640    貼壁       

NCI-H2170   人肺鱗癌細(xì)胞    人  肺鱗癌；男性    1640    貼壁       

RPMI2650    人鼻腔上皮細(xì)胞  人  頭頸鱗癌；胸腔積液轉(zhuǎn)移；男性    DMEM    貼壁       

NCI-H2073   人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞  人  肺腺癌；男性    1640    貼壁       

HSC-5   人皮膚鱗癌細(xì)胞  人  皮膚鱗癌；男性  DMEM    貼壁       

KYSE520 人食管鱗癌細(xì)胞  人  食管鱗癌；女性  DMEM    貼壁       

OCM-1   人眼脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞  人  葡萄膜黑色素瘤；女性    DMEM    貼壁       

VE  人血管內(nèi)皮細(xì)胞  人  血管；內(nèi)皮細(xì)胞  DMEM    貼壁       

NT2/D1  人畸胎瘤細(xì)胞    人  畸胎瘤；肺轉(zhuǎn)移；男性    DMEM    貼壁       

YTMLC-90    人肺鱗癌細(xì)胞    人  肺鱗癌；男性    1640    貼壁       

8305C   人甲狀腺癌細(xì)胞  人  甲狀腺癌；女性  DMEM    貼壁       

L132    人胚胎肺上皮細(xì)胞    人  胚肺；女性  DMEM    貼壁       

3T3-F442A   小鼠脂肪前體細(xì)胞    小鼠    脂肪前體細(xì)胞；雄性；Swiss albino    DMEM    貼壁       

SHI-1   人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞    人  急性單核細(xì)胞白血病；男性    1640    懸浮       

HLE 人肝癌細(xì)胞  人  肝癌；男性  1640    貼壁       

OS-732  人骨肉瘤細(xì)胞    人  骨肉瘤  McCOY's   貼壁       

NCI-H526    人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞    人  小細(xì)胞肺癌；骨髓轉(zhuǎn)移；男性  1640    貼壁   

ReNcell CX  人神經(jīng)干細(xì)胞    人  神經(jīng)干細(xì)胞  DMEM    貼壁   

IHH-4   人甲狀腺癌細(xì)胞  人  甲狀腺乳頭狀癌；男性    DMEM    貼壁   

VK2/E6E7    人陰道上皮細(xì)胞  人  陰道；上皮細(xì)胞；HPV16轉(zhuǎn)化；女性 DMEM    貼壁   

N1E-115 小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞    小鼠    神經(jīng)母細(xì)胞瘤；雄性；A/J EMEM    貼壁   

HMEL    永生上皮細(xì)胞    人  上皮細(xì)胞；永生化    1640    貼壁   

LN229   人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞  人  膠質(zhì)母細(xì)胞瘤；女性  DMEM    貼壁   

PANC05.04   人胰腺癌細(xì)胞    人  胰腺管癌；女性  DMEM    貼壁   

HRVEC   人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞  人  視網(wǎng)膜微血管；內(nèi)皮細(xì)胞  DMEM    貼壁   

rUCMSCs 大鼠臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞    大鼠    臍帶；間充質(zhì)干細(xì)胞  DMEM    貼壁   

rRTEC   大鼠腎小管上皮細(xì)胞  大鼠    腎小管；上皮細(xì)胞    DMEM    貼壁   

HCC1569 人乳腺癌細(xì)胞    人  乳腺管癌；女性  DMEM    貼壁   

Mel-RM  人黑色素瘤細(xì)胞  人  黑色素瘤；神經(jīng)節(jié)轉(zhuǎn)移；男性  DMEM    貼壁   

WM-266-4    人黑色素瘤細(xì)胞  人  黑色素瘤；皮膚轉(zhuǎn)移；女性    DMEM    貼壁   

UT-7    人急性成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞  人  急性成巨核細(xì)胞白血病；男性  1640    懸浮   

KPL1    人乳腺癌細(xì)胞    人  浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌；女性  EMEM    貼壁   

PLA-802 人惡性橫紋肌肉瘤細(xì)胞    人  肺泡橫紋肌肉瘤；男性    DMEM    貼壁   

CEF 雞胚成纖維細(xì)胞  雞  胚胎；成纖維細(xì)胞    DMEM/F12    貼壁   

143B    人骨肉瘤細(xì)胞    人  骨肉瘤；男性    McCoy’s 貼壁   

CT26.CL25   小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞  小鼠    結(jié)腸癌； BALB/c 1640    貼壁   

C166    小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞    小鼠    血管內(nèi)皮    DMEM    貼壁   

A375SM  人惡性黑色素瘤細(xì)胞  人  黑色素瘤；女性  DMEM    貼壁   

HKBML   人原發(fā)中樞淋巴瘤細(xì)胞    人  腦；淋巴瘤；男性    1640    懸浮   

為了應(yīng)付季節(jié)變化CV-1細(xì)胞運(yùn)輸、培養(yǎng)帶來(lái)的真菌等污染問(wèn)題，公司特做以下建議：

1）細(xì)胞的運(yùn)輸、轉(zhuǎn)移過(guò)程中，請(qǐng)勿打開(kāi)自封袋；拿放細(xì)胞時(shí)請(qǐng)持瓶體，切勿在非無(wú)菌環(huán)球中碰觸、擰動(dòng)瓶口封口膜位置

2）進(jìn)入生物安全柜前，打開(kāi)自封袋拿出培養(yǎng)瓶，噴上酒精放進(jìn)操作臺(tái)（不建議使用酒精棉球擦拭），撕開(kāi)封口膜后，用酒精燈外焰對(duì)瓶口燒灼一圈（3秒左右）

3）豎立培養(yǎng)瓶，擰開(kāi)瓶蓋（如是貼壁細(xì)胞，請(qǐng)用真空泵或吸管移除原配培養(yǎng)基，切勿讓瓶口處的液體回流進(jìn)瓶?jī)?nèi)）

4）更換為含10%-20%血清的*培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無(wú)菌操作要求繼續(xù)培養(yǎng)

EL4細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析