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Ⅱ-型膠原羧基末端肽ELISA試劑盒操作步驟

來源:上海遠慕生物科技有限公司   2016年12月26日 16:27  

    Ⅱ-型膠原羧基末端肽(CTx-Ⅱ)ELISA試劑盒該Elisa試劑盒可檢測樣本:血液標本,組織液標本,尿液標本,糞便標本,腦脊液標本,胸腹水標本等(遠慕生物歡迎您前來咨詢)!

    Elisa試劑盒操作步驟(具體操作以說明書為準):

    實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

    1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。
    為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

    2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。

    3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

    4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液)100μl,37℃,60分鐘。

    5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

    6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

    7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

    8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

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