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ELISA常見(jiàn)樣本的處理方法—血液樣本

來(lái)源:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司   2016年12月12日 08:52  

ELISA常見(jiàn)樣本的處理方法—血液樣本


ELISA(酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定)是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法,樣本的處理對(duì)于ELISA實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用。 利用ELISA進(jìn)行檢測(cè)的樣本類型包括常見(jiàn)的血液(血清、血漿),組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見(jiàn)的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等,這些樣本收集的時(shí)間、處理方法和保存都會(huì)影響到ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。下面就常見(jiàn)ELISA血液樣本處理方法的整理,希望對(duì)您有所幫助。


血液采取后應(yīng)盡快進(jìn)行處理,使血清(漿)從與血細(xì)胞接觸的全血中分離出來(lái)。

 

血清與血漿的區(qū)別:

血清是血液凝固后缺少纖維蛋原的血漿,故血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均等同于血清。

 

選擇血清還是血漿樣本?

由于血清中缺乏很多的凝血因子,但有一些凝血產(chǎn)物,如果是測(cè)凝血因子建議選擇血漿樣本;同時(shí)血漿中有纖維蛋白原,如果纖維蛋白原對(duì)待檢測(cè)指標(biāo)有影響,建議選擇血清樣本。大多數(shù)情況下二者均可以選擇。

 

處理方法:

♦  血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時(shí)或 4 度隔夜,然后 1000×g 離心 20分鐘,取上清即可。這是一個(gè)讓血液自然凝固的過(guò)程,溫度溫度越低,凝集越緩慢,可根據(jù)需要添加促凝劑。

♦  血漿:血漿樣本需要抗凝,一般建議用 2.0%EDTA,1%肝素,3.8%枸櫞酸鈉作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2 ~8度 1000 g 離心15 分鐘,取上清即可檢測(cè)。根據(jù)待檢測(cè)目標(biāo)物的性質(zhì)不同選取不同的抗凝劑。


處理樣本的過(guò)程就是收集目標(biāo)蛋白的過(guò)程,由于蛋白容易變性,降解,故該過(guò)程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要,尤其注意不要反復(fù)凍融,樣本處理之后可分裝密封保存, 4 度保存應(yīng)小于 1 周,-20 度不應(yīng)超過(guò) 1 個(gè)月,-80度不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫,不應(yīng)加熱使之融解。樣本的處理是實(shí)驗(yàn)成功的*步, ,以上就是關(guān)于常見(jiàn)樣本處理方法的一個(gè)簡(jiǎn)述,供研究者參考。


恒遠(yuǎn)提醒:
 

如果您選擇的
抗凝劑是

請(qǐng)注意

枸櫞酸鈉
(檸檬酸鈉)

Ca2+有凝血作用,枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物,從而阻止血液凝固。配成109mmol/L 的濃度和血液1:9,106mmol/L 的濃度和血液 1:4。
缺點(diǎn):血液中溶解度低,抗凝作用較弱。
優(yōu)點(diǎn):對(duì)凝血因子有很好的保護(hù)作用,大部分凝血試驗(yàn)都可用枸櫞酸鈉抗凝。

乙二胺四乙酸(EDTA)鹽

與血液中的鈣離子結(jié)合形成配位化合物,從而阻止血液凝固。15g/L EDTA和血液 1:10。
優(yōu)點(diǎn):對(duì)紅細(xì)胞和白細(xì)胞形態(tài)影響小。
缺點(diǎn):影響血小板的聚集。不適用于凝血實(shí)驗(yàn)和血小板功能相關(guān)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)。

肝素

通過(guò)與抗凝血酶Ⅲ結(jié)合,增強(qiáng)抗凝血酶的作用,滅活絲氨酸蛋白酶,從而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集,阻止血液凝固。肝素鈉 1g/L與血液 1:10。
優(yōu)點(diǎn):抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易溶血、能耐高溫。
缺點(diǎn):引起白細(xì)胞聚集。肝素抗凝血應(yīng)于短時(shí)間內(nèi)使用,否則放置過(guò)久血液又可凝固。

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