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ELISA試劑盒免疫組化實驗操作步驟

來源:上海撫生實業有限公司   2016年11月16日 16:16  

 大鼠ELISA試劑盒免疫組化,是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應,即抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學技術或免疫細胞化學技術。
 免疫組織化學技術按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
大鼠ELISA試劑盒免疫組化操作步驟
⑴、石蠟切片脫蠟至水。
⑵、 3%H 2 O 2 室溫孵育 5-10 分鐘,以消除內源性過氧化物酶的活性。
⑶、蒸餾水沖洗, PBS 浸泡 5 分鐘 x2 (如需抗原修復,可在此步后進行)。

⑷、 5-10% 正常山羊血清(PBS 稀釋)封閉,室溫孵育 10 分鐘,傾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 ℃ 孵育 1-2 小時或 4 ℃ 隔夜。
⑸、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。
⑹、滴加適量 生物素標記二抗 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。
⑺、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。
⑻、滴加適量的 辣根酶或堿性磷酸酶標記的鏈霉卵白素 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。
⑼、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。
⑽、顯色劑顯色 3-15 分鐘(DAB 或 NBT/BCIP)
⑾、自來水充分沖洗,復染,脫水,透明,封片。
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