開學季，買人Burkitts淋巴瘤細胞培養技術，更多好禮相送，買的*，買的舒心

購買試劑銷售人Burkitts淋巴瘤細胞培養技術注意事項如下：

1 收到細胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們。

2 對于貼壁細胞，若細胞漂浮：培養瓶不開封，用75%酒精擦拭后平躺置于培養箱內。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉；如細胞還不貼壁，將細胞離心收集移到新的培養瓶中，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

3 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和本公司技術部溝通交流。

我們全心全意為您服務，提供產品，保障售后服務，真心把客戶奉為上帝，及時處理客戶訂單，全程跟蹤貨源，采用誠信快遞運輸，認真解答客戶疑問，對客戶售后問題，不拖沓，不推卸責任，認真負責的態度。人Burkitts淋巴瘤細胞培養技術

第二節 細胞分離技術

一、從原代組織中分離細胞 將組織塊分離（散）成細胞懸液的方法有多種，zui常用的是機械解離細胞法、酶學解離細胞法以及螯合劑解離細胞法。

從原代組織中獲得單細胞懸液的一般方法是酶解聚。細胞暴露在酶中的時間要盡可能的短，以保持zui大的活性。下列步驟可以解聚整個組織，獲得較高產量的有活性細胞。

1、胰蛋白酶 (Trypsin)

在去除不需要的組織后，使用無菌的解剖刀和剪子把剩余的組織切成3~4mm小片，通過懸浮在無鈣鎂的平衡鹽溶液中清洗組織碎片。讓組織碎片沉淀，去除上清液。重復清洗2到3次。

將盛有組織碎片的容器置于冰上，去除殘留的上清液。加入0.25％溶解在無鈣鎂的平衡鹽溶液中的胰蛋白酶（100mg組織加入1ml 胰蛋白酶）。

在4℃孵育6到18小時，使幾乎沒有胰蛋白酶活性的酶盡可能滲透進去。

移棄組織碎片中的胰蛋白酶，在37℃孵育包含殘留胰蛋白酶的組織碎片20到30分鐘。

在組織碎片加入熱的*培養基，用移液管輕輕地分散組織。如果使用無血清培養基，要加入大豆胰蛋白酶抑制劑。

通過無菌不銹鋼絲網（100～200mm）過濾，分散所有剩余組織。計數和接種細胞，進行培養。

2、膠原酶 (Collagenase)

用無菌解剖刀和剪子把剩余組織切成3~4mm小片，用Hanks'平衡液（HBSS）清洗組織碎片幾次。

加入膠原酶（50～200單位/ml，溶解在HBSS中）。

在37℃孵育4到18小時。加入3mM CaCl₂增加解離效率。

通過無菌不銹鋼絲網或尼龍網過濾細胞懸液，以分離分散細胞、組織碎片和較大的碎片。如果需要進一步的解聚，在碎片中加入新鮮的膠原酶。

通過離心在HBSS中清洗懸液幾次。

再一次在培養基中懸浮細胞，計數和接種細胞，進行培養。

3、Dispase

用無菌解剖刀和剪子把剩余組織切成3~4mm小片，用不含鈣鎂的平衡鹽溶液清洗組織碎片幾次。加入Dispase（0.6～2.4單位/ml 溶解在無鈣鎂的平衡鹽溶液）在37℃孵育20分鐘到幾個小時。

通過無菌不銹鋼絲網或尼龍網過濾細胞懸液，以分離分散細胞、組織碎片和較大的碎片。如果需要進一步的解聚，在碎片中加入新鮮的Dispase。通過離心在平衡鹽溶液中清洗懸液幾次。再一次在培養基中懸浮細胞，計數和接種細胞，進行培養。

801-D 細胞，人巨性肺癌細胞

CRL-7729細胞，人口腔癌細胞

KB細胞，人口腔表皮樣癌細胞

TSC-15細胞，人口腔鱗癌細胞

HN13細胞，人口腔鱗狀癌細胞

UT-7細胞，人類原巨核白血病細胞

Daudi細胞，人淋巴瘤細胞

RMA-S細胞，人淋巴瘤細胞

Romas細胞，人淋巴瘤細胞

T2(174×CEM.T2)細胞，人淋巴母細胞

 SW1910細胞，人卵巢癌細胞

3AO細胞，人卵巢癌細胞

A2780細胞，人卵巢癌細胞

Anglne細胞，人卵巢癌細胞

C200細胞，人卵巢癌細胞

CoC1細胞，人卵巢癌細胞

HEL細胞，人卵巢癌細胞

Hey細胞，人卵巢癌細胞

HO-8910細胞，人卵巢癌細胞

HOC1細胞，人卵巢癌細胞

OVAC細胞，人卵巢癌細胞

OVCAR-3細胞，人卵巢癌細胞

OVCAR-5細胞，人卵巢癌細胞

SK-OV-3細胞，人卵巢癌細胞

SW626細胞，人卵巢癌細胞

TOV-21G細胞，人卵巢癌細胞

CoC1/DDP細胞，人卵巢癌CoC1順鉑耐藥亞株細胞

A2780/DDP細胞，人卵巢癌耐DDP細胞

PA-1細胞，人卵巢畸胎瘤細胞

ES-2細胞，人卵巢透明癌細胞

K562細胞，人慢性髓原白血病細胞

K562-A細胞，人慢性髓原白血病細胞

HCE-8962細胞，人盲腸未分化癌細胞

HCT-8細胞，人盲腸腺癌細胞

Hce-8693細胞，人盲腸腺癌（未分化）細胞

HNE1/DDP細胞，人耐DDP鼻咽癌細胞

二、從原培養容器中分離細胞:以下是從基層迅速分離細胞，且保持細胞完整性的一般步驟。這一步驟并不意味著對于所有細胞系的廣泛應用，每一種系統*條件和施用濃度應該根據經驗加以確定。再次培養時檢測細胞的活性。細胞的活率應該超過90％對于無血清培養基，降低胰蛋白酶使用量。

1、移棄使用過的細胞培養基。

2、使用不包含有鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA(ethylene diamine tetraacetic acid，乙二胺四乙酸.)清洗細胞（看表確定正確的清洗溶液）。在培養瓶對著細胞的一面加入清洗溶液，通過轉動培養瓶1到2分鐘清洗細胞層，然后去除清洗液。

3、以2～3ml/25cm²的量，加選擇的分離液(見表)到培養瓶對著細胞的一面。確保分離液覆蓋細胞層。在37℃孵育培養瓶，輕輕搖動培養瓶。通常，在5到15分鐘內，細胞就會脫落。細胞分離需要的時間因細胞系不同而有所變化。仔細監測細胞分離過程，避免細胞受損傷。對難于從培養瓶基層分離的細胞系，可以輕輕敲打，以加速分離過程。

4、當細胞*分離時，垂直放置培養瓶，讓細胞流到培養瓶的底部。在培養瓶中加入*培養基，通過移液管在單層細胞表面反復吹打來分散細胞。計數并再次培養細胞。

5、對于無血清培養基，加入大豆胰蛋白酶抑制劑。通常使用1∶1（v∶v）0.25mg/ml胰蛋白酶抑制劑到胰蛋白酶中將抑制胰蛋白酶活性