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4T1細胞,4T1細胞株 細胞培養(yǎng)技術

來源:上海慧穎生物科技有限公司   2016年09月06日 10:39  

4T1細胞,4T1細胞株 細胞培養(yǎng)技術

細胞名稱:4T1細胞株

組成:

組份

數(shù)目

細胞

1 T-25瓶

細胞說明書

一份

細胞簡介:

生長特性:

貼壁

細胞來源:

從ATCC引進/中科院/協(xié)和醫(yī)院等引進

培養(yǎng)液:

1640 +10%FBS(德國SERANA胎牛血清

細胞總數(shù):

1~3*106

傳代周期:

2-3天

傳代比例:

1:2~1:4

換液頻率:

2-3天

凍存液:

95%FBS+5%DMSO

細胞狀態(tài):

良好

注意事項:

對于貼壁細胞,若細胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開封,用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內。次日觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,換成新鮮的培養(yǎng)基;如細胞還不貼壁,將細胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中,原培養(yǎng)瓶加部分新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。對于懸浮細胞:收到細胞后,將細胞全部離心,去掉舊的培養(yǎng)基,換成新鮮的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

 

特別注意:(如使用公共實驗室或者初次接觸,建議添加雙抗培養(yǎng))

 

(1)貼壁細胞收到當天有少量或沒有飄忽的細胞可以當天換液,因為路途顛簸造成大量飄忽的情況時,請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)

 

(2)收到細胞后請盡快更換為含10%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清,(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過72小時)

 

(3)如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請及時做好照片記錄并SUER技術人員

 

細胞接收后的操作流程與注意事項:

 

1)貼壁細胞生長緩慢;適當提高血清濃度(zui高不能超過20%),或可根據(jù)該細胞生長特性生長密度,考慮胰酶消化后,轉移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)

 

2)如果細胞為貼壁細胞,而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,請及時實驗室技術人員會跟進解決

 

3)生長不均:貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長,可將細胞進行消化,重懸打散細胞,加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)

 

細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)

 

(1)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在1-2min)

 

(2)注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存

 

(3)取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)?培養(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

 

(4)鏡下觀察消化情況,在細胞生長特性邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml*培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。

 

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