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Vanquish Core帶你探索生命之源

閱讀:630      發布時間:2021-7-7
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 蛋白質作為生命的物質基礎,可以說沒有蛋白質就沒有生命,而氨基酸作為蛋白質的基本單位,可以說是生命之源。

氨基酸分子為手性分子,有左旋和右旋兩種光學異構體,被稱為L型(左)和D型(右)兩種。照常理講,氨基酸化學反應需要L型氨基酸和D型氨基酸等量搭配作用。但存在于地球上所有的生物體中,氨基酸都為左旋型。這種被戲稱為“左撇子地球”的偏差一直是一個謎題。

 

在古生物化石中,我們卻能發現D型氨基酸的存在。這是由于生物死亡后埋在地下,有機體在自然條件下也被水解為氨基酸保存在化石中,但氨基酸的左旋體結構慢慢地會向右旋體結構轉化,而各種左旋體結構的氨基酸都有自己的“半衰期”,考古學家就可以依據化石中氨基酸左旋體與右旋體的比例來確定化石的年代。

目前測定氨基酸通常使用氨基酸專用分析儀或液相色譜儀,而液相色譜法的廣泛適用性具有其優勢性,但常規液相檢測氨基酸的分析中,需要進行衍生化處理,由于氨基酸衍生產物衰減較快,而離線手動衍生操作至進樣分析的時間和操作強度很難保證均一,常常導致結果不穩定。

Vanquish Core

賽默飛全新的Vanquish Core 液相色譜儀,無需繁瑣的離線手動衍生化操作,只需2ul以內的樣品,利用鄰苯二甲醛/ N-異丁酰基-L-半胱氨酸 (OPA/IBLC)在線柱前衍生化,生成非對映異構體衍生物(如圖1所示),無需成本較高的手性柱,即可完成L型和D型氨基酸異構體的分離和測定。

圖1 衍生化過程

  

儀器配置:

• 系統底座:Vanquish System Base (VC-S01-A)

• 泵:Vanquish Binary Pump C(VC-P10-A-01)

• 自動進樣器:Vanquish Split Sampler CT(VC-A12-A-02)

• 柱溫箱:Vanquish Column Compartment C(VC-C10-A-03)

• 檢測器:Vanquish Fluorescence Detector(VC-D50-A-01)

色譜條件:

• 色譜柱:Accucore XL C18(150mm×4.6 mm,4 μm,P/N:74104-154630)

• 流動相:A:50mM乙酸鈉水溶液(pH=6.0);B:乙腈/甲醇/水=45:45:10,

流速:1.0 mL·min-1,梯度洗脫見表1

表1 梯度洗脫程序

 

• 進樣量

混標:0.5ul ( 注:在線衍生試劑需0.25 ul)

樣品:2.0ul ( 注:在線衍生試劑需2.2 ul)

• 柱    溫:30℃

• 檢測器:激發波長:230nm,發射波長:450nm,靈敏度:5,燈模式:標準

 

在線針內衍生程序

和常規進樣方式相比,在線針內衍生方法需要使用Vanquish Core液相的用戶自定義進樣程序功能(User Defined Program,UDP),氨基酸在線針內衍生程序見圖2。

 

圖2 在線針內衍生程序

 

Position R:A2, 硼酸緩沖液;Position R:A3, 衍生試劑;

 Position R:A4, 稀釋液(點擊查看大圖)

 

表2 衍生劑信息

色譜圖:

實驗結果與討論 

本方法使用OPA/IBLC作為手性拆分衍生化試劑,利用全自動衍生功能的自動進樣器進行在線衍生,衍生后直接進樣分析,完成了手性異構體氨基酸的分離測定,消除了離線衍生進樣時間不同和手工操作造成的誤差,不僅提高了結果的準確性,而且大大降低了成本和工作強度。

 

不止于此

Vanquish Core 液相色譜儀不僅可用于生命的探索,對于測定我們目前生活密切相關的食品、藥品以及化妝品中的氨基酸,Vanquish Core 液相色譜儀也不在話下。其可*《SN/T 5223— 2019 蜂蜜中18 種游離氨基酸的測定gao效液相色譜- 熒光檢測法》中在線自動衍生法測定氨基酸;而對于中草藥中的氨基酸,膠原蛋白、肽類等化妝品中的氨基酸,Vanquish Core液相色譜儀也均可滿足測定和研發的需求。另外,Vanquish Core液相色譜儀結合賽默飛du有的電霧式檢測(CAD)無需衍生化處理,可直接完成氨基酸的測定,省時省力更經濟。

 

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