果膠酯酶（pectinesterase，PE）試劑盒說明書

(NaOH 滴定法)50 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

果膠酯酶, 屬果膠酶系,亦稱為果膠酶、果膠甲酯酶、果膠氧化酶。催化水解果膠長鏈上的甲氧酯水解產生小分子物質果膠酸和甲醇, 從而增加果膠在水中的溶解度。廣泛存在于高等植物和可以降解細胞壁的細菌和真菌中，起內源調控植物細胞壁上及細胞之間果膠含量的作用，在食品工業中具有及其重要的作用和開發前景。

測定原理：

果膠酯酶催化水解果膠分子釋放H⁺，使反應體系的 pH 下降，用堿液維持體系的 pH 始終保持在 7.8(fen酞指示劑維持在粉紅色)，通過堿消耗的NaOH 量反映果膠酯酶的活性。

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試劑的組成和配制：

提取液：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前每瓶加雙蒸水 100ml 充分溶解。

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加少量蒸餾水溶解，然后轉入 500ml 容量瓶，用蒸餾水定容至500ml。

試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。易揮發，使用后及時用封口膜封口。試劑四：用蒸餾水將試劑三稀釋 5 倍，得試劑四。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

需自備的儀器和用品：

天平、研缽、離心機、烘箱。

樣品處理：

稱取 1g 組織樣品，加入 2ml 提取液冰浴充分研磨（研缽提前-20℃預冷 10min，提取液提前 4℃預冷?？梢愿鶕蛻糇约旱臉颖咎厥庑?，自行按比例調整），12000g、4℃離心 15min，取全部上清液待測。

測定步驟：

1、試劑一于 37℃烘箱保溫 10min，樣本全部提取上清（約 2ml）分別轉移至 15 ml 離心管或者試管中。

2、向樣本上清中分別加入 50μl 試劑二，混勻。然后每管加入 8 ml 試劑一混勻，并用試劑四調節 pH至 7.8（粉紅色）。

3、將上述各離心管或試管放置 37℃烘箱 60 分鐘。每隔 20 分鐘用試劑四調節 pH，使pH 維持在 7.8（粉紅色）。記錄所消耗的試劑四的體積V（ml）。

計算公式：

酶活定義：每 g 組織每分鐘消耗 1μmol NaOH 定義為一個酶活單位 U。 PE 活性（U/g）= 20VF/(TW)= VF/(3W)

V：滴定所消耗的試劑四的量，ml；T：反應時間，60 min；F：樣品稀釋倍數；W：樣品質量，g

注意事項

1、試劑一提前預熱，保證酶反應速率。

2、實驗前先做預實驗，如果酶活力太高，適當調整樣本稀釋倍數，如將樣品稀釋 2-5 倍進行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數。

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