查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase, CHI)試劑盒說(shuō)明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase, CHI)是第一個(gè)被認(rèn)識(shí)的黃酮類化合物合成相關(guān)酶，也是黃酮代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一。查爾酮異構(gòu)酶和查爾酮合酶一起構(gòu)成了黃酮類化合物生物合成的限速酶。

測(cè)定原理：

查爾酮異構(gòu)酶（CHI）催化查爾酮環(huán)化形成 4,5,7-三羥基黃烷酮，通過(guò)測(cè)定 381nm 下的吸光度變化表示CHI 的活性。

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組成：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；用時(shí)加入 50ml 試劑一充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提取：

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定操作表:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 381nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定表

在 1ml 玻璃比色皿中加入 50µl 上清和 950µl 試劑二，立即混勻并記錄 381nm 下初始吸光值A1 和 37℃保溫 30min 后的吸光值 A2。計(jì)算ΔA＝A2-A1。

CHI 活性計(jì)算：

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg 組織蛋白在每ml 反應(yīng)體系中每小時(shí)A381 變化 0.1 為一個(gè)酶活力單位。

CHI（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.1÷T =400×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g 組織在每ml 反應(yīng)體系中每小時(shí) A381 變化 0.1 為一個(gè)酶活力單位。

CHI（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.1÷T =400×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1ml； V 樣：加入樣本體積，0.05ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量。

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