丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

丙二醛含量試劑盒 氧化

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質(zhì)；后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物，其中包括MDA。通過檢測(cè)MDA 的水平即可檢測(cè)脂質(zhì)氧化的水平。

測(cè)定原理：

MDA 與硫代巴bi妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產(chǎn)物，在 532nm 有最大吸收峰，進(jìn)行比色后可估測(cè)樣品中過氧化脂質(zhì)的含量；同時(shí)測(cè)定 600nm 下的吸光度，利用 532nm 與 600nm 下的吸光度的差值計(jì)算MDA 的含量。

試劑的組成和配置：

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

注意事項(xiàng)

臨用前注意試劑一是否wan全溶解，如未溶解，可以 70℃-90℃加熱，并振蕩以促進(jìn)溶解。

MDA 提取：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 4、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、吸取 0.3ml 試劑一于 1.5ml 離心管中，再加入 0.1ml 樣本, 混勻。

2、95℃水浴中保溫 30min（蓋緊，防止水分散失），置于冰浴中冷卻，10000g，25℃，離心 10min。

3、吸取 200μl 上清液于微量石英比色皿或 96 孔板中，測(cè)定 532nm 和 600nm 處的吸光度，記為A532和A600，ΔA= A532-A600。

MDA 含量計(jì)算：

用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清（漿）中MDA 含量的計(jì)算：

MDA 含量(nmol/ ml)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣=25.8×ΔA 2、細(xì)菌、細(xì)胞或動(dòng)物組織中 MDA 含量計(jì)算

按照蛋白濃度計(jì)算

MDA 含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣)=25.8× ΔA ÷Cpr

需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。

按照樣品質(zhì)量計(jì)算

MDA 含量(nmol/g 鮮重)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)=25.8×ΔA ÷W (3 ) 按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

MDA 含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)=0.0516×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積， 4×10-4 L；ε：丙二醛摩爾消光系數(shù)，155×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑， 1cm；V 樣：加入樣本體積，0.1 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。

用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清（漿）中MDA 含量的計(jì)算：

MDA 含量(nmol/ ml)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣=51.6×ΔA 2、細(xì)菌、細(xì)胞或動(dòng)物組織中 MDA 含量計(jì)算

按照蛋白濃度計(jì)算

MDA 含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣)=51.6×ΔA÷Cpr需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。

按照樣品質(zhì)量計(jì)算

MDA 含量(nmol/g 鮮重)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)=51.6×ΔA÷W (3 ) 按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

MDA 含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)=0.1032×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，4×10-4 L；ε：丙二醛摩爾消光系數(shù)，155×103 L / mol /cm；d：96 孔板光徑， 0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.1 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml； W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。

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