過氧化氫酶（Catalase，CAT）試劑盒（鉬酸銨比色法）說明書

分光光度法 50 管/48樣

過氧化氫酶試劑盒 鉬酸銨比色法 抗逆

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是最主要的H2O2 清除酶，在活性氧清除系統中具有重要作用。

測定原理：

組成：

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 405 nm。

2、在EP 管中加入下列試劑

CAT 活性計算：

1、標準曲線：y = 0.18x + 0.0013       R2 = 1          x：體系中過氧化氫濃度變化值（μmol/ml）

y：吸光值差值ΔA

2、血清（漿）CAT 活力的計算:

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化 1μmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。

CAT(μmol /min/ml)= =(ΔA-0.0013)÷0.18×V 反總÷V 樣÷T

=222.22×(ΔA-0.0013)

3、組織、細菌或細胞中 CAT 活力計算：

（1）   按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化 1μmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。

CAT(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0013)÷0.18×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=222.22×(ΔA-0.0013)÷Cpr

（2）   按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g 組織每分鐘催化 1μmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。

CAT(μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0013)÷0.18×V÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T=222.22×(ΔA-0.0013)÷W

V 反總：反應體系總體積，1.2 ml；V 樣：加入樣本體積，0.015 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，2 min；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml。

注意事項：

1、預實驗若發現酶活性過高（A 測定＜0.1），可用提取液適當稀釋樣品后測定，并在計算公式中乘以相應稀釋倍數。

2、若 A 空白＜A 測定，一方面可能是酶活性過低，可將反應時間 2 延長到 5min,另一方面可能樣本中雜質干擾嚴重，可將樣本稀釋 5 倍左右后測定，并在計算公式中代入實際反應時間和乘以相應稀釋倍數。

過氧化氫酶試劑盒 鉬酸銨比色法 抗逆