NobleRyder M0238 NHS磁珠Mag NHS NHS magnetic beads

NHS磁珠Mag NHS-常備現貨

產品貨號：M0238

產品名稱：NHS磁珠Mag NHS NHS magnetic beads

英文名稱：NHS magnetic beads

產品規格：1ml/5ml

產品簡介：

說明：10mg/mL

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder M0238 NHS磁珠Mag NHS NHS magnetic beads

Mag NHS和 Magrose NHS都是表面為NHS基團修飾，能夠與帶有伯胺基團的蛋白和其他分子形成穩定的肽鍵，用于親和純化抗體、抗原和其他生物分子。與傳統的羧基、an基磁珠相比，表面含NHS基團的磁珠無需事先采用EDC/NHS 或戊二醛進行活化，只需簡單地將含伯氨基的生物配體溶解在試劑盒自帶的Coupling Buffer 中，室溫下將蛋白與NHS磁珠混合1~2h便可將生物配體共價偶聯到磁珠上，具有操作簡單、偶聯條件溫和、生物配體偶聯快速高效等優點。磁珠偶聯過程必需在不含任何氨基的緩沖溶劑中進行。人工操作時，使用磁性分離架實現磁珠與溶劑分離。也可采用自動化設備操作，自動化操作適合用于多樣品的篩選。

蛋白偶聯操作流程及優化點（僅供參考）

1.蛋白溶液的配制

2.磁珠的洗滌

3.蛋白偶聯：（優化）

(1) Coupling Buffer 的種類。首先通過實驗確定最合適的CouplingBuffer

 (2) 確定合適的 CouplingBuffer 后，再通過實驗優化蛋白溶液的濃度

4.封閉

5.磁珠保存

6.注意事項：

(1) 其中磁珠洗滌要嚴格按照說明書采用冷卻的 WashingBufferA快速洗滌 ，以防磁珠在洗滌過程中 NHS 基團水解；

(2) 蛋白偶聯過程中，首先要通過實驗確定合適的 CouplingBuffer（主要包括 CouplingBufferA、Coupling Buffer B、50mM 硼酸溶液，pH8.5、100mM磷酸緩沖液，100mMNaCl，pH7.4 這四種）

(3) 確定合適的 CouplingBuffer 后，再以此 CouplingBuffer 為基礎，確定合適的偶聯蛋白濃度，因為蛋白濃度越高，偶聯到磁珠上的蛋白的量會越大（這是由于 NHS 基團跟蛋白偶聯和 NHS基團本身水解是一對競爭反應）。當然此處要綜合考慮使用性能和成本，有些客戶偶聯少量的蛋白便可滿足使用需求，這時采用低濃度的蛋白便可，這樣可以降低成本。

(4) 封閉這一步可以采用試劑盒中自帶的 3M 乙醇胺，也可使用 Tris 緩沖液（100mMTris-HCl,150 mMNaCl, pH 8.0），封閉時間不得低于 2h，如果化學封閉后背景仍然很高，還可以額外加一步 BSA 封閉。

蛋白偶聯操作步驟（僅供參考）

一、使用前準備

以下操作過程以取磁珠樣品 500μL，采用 1.5mLEP 管為例介紹。用戶可根據自身需求按比例調整：

1. 蛋白溶液配制：

取適量待偶聯蛋白用 CouplingBuffer 溶解，配成濃度為0.1-3.0mg/mL 的蛋白溶液。已經保存于 buffer 中的蛋白，需要通過透析或者脫鹽的方法徹di除去原有 buffer 里含伯胺基的物質，然后

再用 CouplingBuffer 配成濃度為0.1-3.0 mg/mL 的蛋白溶液，將配制好的蛋白溶液于 4oC 保存備用。

注： (1)為了達到更好的性能，蛋白濃度≥2.0mg/mL，這樣偶聯效率會更高，此處需綜合考慮成本和使用要求；

(2)蛋白溶液中不能含有帶伯氨基的成分，比如Tris，甘an酸，明膠，BSA 等；

2.磁珠清洗：

(1) 取 500μL 磁珠于 1.5mLEP 管中。

注：磁珠取樣前要反復顛倒、使用渦旋振蕩器使其混合均勻，以保證實驗的同一性。

(2) 將 EP管置于磁性分離架內，富集磁珠，去除上清液。

(3) 加 1mL2~8oC 預冷的WashingBufferA于1.5mLEP管中，渦旋15s，使磁珠混合均勻。

(4) 將 EP 管置于磁性分離架內，富集磁珠，去除上清液。

2. 生物配體固定：

(1) 加 500μL 蛋白溶液于EP管中，渦旋30s，使其混合均勻。

注：磁珠洗滌后要立即加入蛋白溶液。

(2) 將 EP 管渦旋15s，置于垂直混合儀上，室溫混合1~2h。如果垂直混合不均勻，則反應前30min，每隔5min取下EP管渦旋15s。此后，每隔15min，取下EP管渦旋15s。

注：如有需要可以4oC過夜反應。

(3) 采用磁性分離架富集磁珠，保存流穿液

3. 磁珠封閉：

(1) 加 500μLBlocking Buffer 于 EP 管中，渦旋30s，將 EP 管置于磁性分離架內，富集磁珠，棄上清液。

注：Blocking Buffer 除了試劑盒中提供的3M乙醇胺外，也可以使用100mMTris-HCl,150mMNaCl, pH 8.0 等其它封端試劑。

(2) 重復“步驟 （1）"四次。

(3) 加 500μLBlocking Buffer 于 EP 管中，渦旋 30s，將 EP 管置于垂直混合儀中室溫反應2h。

(4) 將 EP 管置于磁性分離架內，富集磁珠，棄上清液。

(5) 加 1mL 超純水于 EP 管中，充分混合，用磁力架富集磁珠，棄上清液。

4. 保存：

(1) 加 1mLStorage Buffer（需客戶自備，比如含0.05%疊dan化na或0.1%proclin-300的PBS 緩沖液，或者客戶根據自己實際需求選擇合適的保存溶液 ）于EP管中，充分混合，用磁力架富集磁珠，棄上清液。重復該操作 2 次。

(2) 加入0.5mLStorage Buffer 于 EP 管中，充分混合，4oC保存備用。

注：最終偶聯蛋白的磁珠濃度為10mg/mL.

注意事項：

1. 磁珠對水分敏感。為了保證產品質量，在取樣之后需立即蓋上瓶蓋，并用封口膜密封，于 4℃保存。

2. 禁止將磁珠干燥或冷凍。干燥和冷凍操作可能導致磁珠的聚集從而喪失結合活性。

3. 使用280nm附近的波長來測定蛋白含量是不可取的，因為 NHS 基團在280nm波長附近有很強的吸收，會嚴重干擾檢測結果。

4. 緩沖液中含有帶伯胺的物質會抑制蛋白質偶聯到磁珠表面，去除伯胺物質可采用透析和脫鹽的方法。

5. 蛋白穩定劑（如BSA，gelatin）會抑制抗體與磁珠的結合，因此在磁珠偶聯抗體過程中，需要確保抗體保存體系中不存在含伯氨基的蛋白穩定劑。

6. NHS 基團易水解，故在用 WashingBufferA 洗滌時，一定要參照說明書進行。

7. 蛋白溶液要預先配制好，WashingBufferA 洗滌完畢后，要立即加入蛋白溶液進行偶聯反應。

8.蛋白質和磁珠的偶聯效率因蛋白質種類和性質差異而不同。一般而言，蛋白質濃度為0.1-3.0 mg/mL 時利于蛋白質偶聯；然而，對于不同的蛋白其濃度需要優化。

NHS磁珠Mag NHS-常備現貨

產品訂購信息：

M0238  NHS磁珠Mag NHS NHS magnetic beads  1ml/5ml