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【微課堂】自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑核心性能淺析

2024-3-22　　閱讀(281)

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壓力蒸汽滅菌因其高效、適用范圍廣等特點，廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、制藥等行業(yè)。壓力蒸汽滅菌效果需通過驗證來確認。2020版《中國藥典》指出，生物指示劑的被殺滅程度，是評價一個滅菌程序有效性最直觀的指標。


圖1：自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑
應(yīng)用場景-壓力蒸汽滅菌鍋驗證



生物指示劑可分為載體型，芽孢懸液和自含式三種。其中自含式生物指示劑自帶培養(yǎng)基，可在普通環(huán)境下接種，使用非常方便。
本文就泰林自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑產(chǎn)品的特點及核心性能進行探討。

圖2：泰林自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑結(jié)構(gòu)圖

培養(yǎng)基性能




培養(yǎng)基性能包含無菌性能和恢復(fù)生長性能兩方面，無菌性能不合格可能產(chǎn)生假陽性，而培養(yǎng)基恢復(fù)生長性能不合格可能導(dǎo)致假陰性，影響滅菌驗證結(jié)果判斷。無菌性能要求生物指示劑內(nèi)含的培養(yǎng)基培養(yǎng)后仍呈陰性；恢復(fù)生長性能要求生物指示劑內(nèi)含恢復(fù)培養(yǎng)基經(jīng)過滅菌后接種不大于100cfu的嗜熱脂肪地芽孢桿菌，置于55℃～60℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h，應(yīng)呈陽性結(jié)果。
圖3：指示劑培養(yǎng)結(jié)果（紫色為陰性  黃色為陽性）
菌種




國內(nèi)外法規(guī)均指出，嗜熱脂肪地芽孢桿菌（Geobacillus stearothermophilus）可以用來監(jiān)測壓力蒸汽滅菌效果。該菌種營養(yǎng)細胞呈長桿狀、圓端，多數(shù)為單個、少數(shù)成對或鏈狀排列，細胞壁為革蘭陽性結(jié)構(gòu)，芽孢呈橢圓或柱狀，芽孢無致病性、對壓力蒸汽的抗力非常強。
芽孢率




根據(jù)2020版《中國藥典》9207 <滅菌用生物指示劑指導(dǎo)原則>的要求，生物指示劑的芽孢含量應(yīng)在90%以上。可將生物指示劑的載體置于適量的稀釋液中通過攪拌、渦旋、超聲波（振蕩器）、離心，或其他適宜的方法方法處理，獲得芽孢懸液，再通過芽孢染色觀察視野中芽孢和菌體的比值進行判斷。

圖4：顯微鏡下芽孢染色圖

總芽孢數(shù)




生物指示劑的總芽孢數(shù)應(yīng)在標示值的50%～300%。可將紙片載體從初級包裝中取出，置于適量的稀釋液中，紙質(zhì)載體通過攪拌、渦旋、其他不易破碎的載體通過超聲波（振蕩器）、反復(fù)振搖，或其他適宜的方法處理，再95℃~100℃熱激活處理15min后轉(zhuǎn)移至0℃～4℃的冰水浴中迅速冷卻至室溫，用滅菌純化水進行10倍系列稀釋，采用傾注法或涂布法進行芽孢計數(shù)。
抗性（D值）




生物指示劑對滅菌過程的挑戰(zhàn)必須超出物品的微生物負荷量及耐受性，以保證滅菌程序有更大的安全性。一般來說，生物指示劑的抗性用D值來表示。D值是指將試驗微生物殺滅90% 所需的滅菌時間或滅菌劑量。自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑需使用抗力儀進行D值測定，通過陰性分數(shù)法或殘存概率法計算其D值，滅菌溫度一般為121℃，D值應(yīng)處于1.5min~3min的范圍內(nèi)。
圖5：泰林壓力蒸汽滅菌生物指示劑抗力儀
培養(yǎng)耐受性




自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑需在55℃~60℃下培養(yǎng)，在必需的培養(yǎng)周期內(nèi)，培養(yǎng)基的揮發(fā)難以避免。
市場上不少自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑培養(yǎng)前需使用封口膜或其他封口材料對透氣孔進行封堵，否則培養(yǎng)周期內(nèi)培養(yǎng)基迅速蒸發(fā)，培養(yǎng)結(jié)果難以觀察。
故培養(yǎng)耐受性也是自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑不可忽視的核心性能。
圖6：不同廠家的自含式生物指示劑培養(yǎng)基蒸發(fā)率測試
性能優(yōu)勢


①二段式組合帽塞，培養(yǎng)48小時水分揮發(fā)不足10%，解決了培養(yǎng)不耐受的難題；
②優(yōu)良透析紙選材，兼顧有效阻菌性與高透氣性；
③培養(yǎng)基性能、芽孢率、芽孢含量、D值經(jīng)過多次驗證和測試均符合要求；
④高透明度瓶體，便于觀察，結(jié)果判斷準確；
⑤含化學(xué)指示劑標簽，滅菌后差異明顯，便于分組判斷使用方便。

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