采用艾德曼降解法的N端測(cè)序：如何優(yōu)化實(shí)驗(yàn)以獲得準(zhǔn)確結(jié)果檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

艾德曼降解法（Edman Degradation）是經(jīng)典的 N 端測(cè)序技術(shù)，通過(guò)逐步降解dànbáizhì或多肽的 N 端氨基酸并鑒定其序列。盡管該方法具有高特異性，但受樣本質(zhì)量、反應(yīng)效率及背景干擾的影響，實(shí)驗(yàn)優(yōu)化對(duì)于提高測(cè)序準(zhǔn)確性至關(guān)重要。本文將圍繞樣本制備、反應(yīng)條件、檢測(cè)分析及誤差控制進(jìn)行優(yōu)化策略探討。

一、樣本制備優(yōu)化

1、提高dànbáizhì純度

高純度蛋白能減少雜質(zhì)干擾，提升測(cè)序準(zhǔn)確性。可采用高效液相色譜（HPLC）、親和層析或離子交換層析純化蛋白，避免變性劑影響 N 端氨基酸的反應(yīng)活性，同時(shí)確保蛋白濃度滿足測(cè)序要求。

2、解除 N 端封閉修飾

N 端封閉（如乙酰化、甲基化）會(huì)阻礙降解反應(yīng)。可采用化學(xué)脫修飾（如堿性水解）或蛋白酶切割（如 Asp-N、Glu-C）生成新 N 端，確保測(cè)序順利進(jìn)行。

3、蛋白固定策略

常用 PVDF 膜或玻璃纖維基質(zhì)進(jìn)行蛋白固定，以提高反應(yīng)穩(wěn)定性。優(yōu)化電泳轉(zhuǎn)移條件，減少蛋白損失，降低非特異性吸附帶來(lái)的背景干擾。

二、反應(yīng)條件優(yōu)化

1、試劑純度控制

艾德曼降解依賴高純度苯基異硫氰酸酯（PITC）和有機(jī)溶劑（三fúyǐsuān TFA），避免低純度試劑帶來(lái)的背景噪聲，確保氨基酸衍生物的穩(wěn)定性。

2、溫度與時(shí)間控制

艾德曼降解反應(yīng)的zuì佳溫度通常在室溫到低溫范圍內(nèi)，過(guò)高的溫度可能導(dǎo)致氨基酸衍生物降解，而過(guò)低的溫度則降低反應(yīng)速率。此外，優(yōu)化每步反應(yīng)時(shí)間有助于提高收率和信號(hào)強(qiáng)度。

3、緩沖液優(yōu)化

適當(dāng)調(diào)整緩沖液的pH值和成分，有助于維持dànbáizhì的穩(wěn)定性并提高反應(yīng)效率。例如，選擇適當(dāng)?shù)膲A性緩沖體系可增強(qiáng)N端氨基酸的反應(yīng)性，提高N端測(cè)序的結(jié)果準(zhǔn)確性。

三、檢測(cè)分析優(yōu)化

1、高效液相色譜（HPLC）分離

PTH-氨基酸衍生物的檢測(cè)通常采用HPLC進(jìn)行分離和鑒定。優(yōu)化流動(dòng)相和梯度洗脫條件，可以提高分辨率并減少共洗脫干擾。

2、靈敏度提升

采用熒光或紫外檢測(cè)方法可提高PTH-氨基酸的檢測(cè)靈敏度。增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)的方法包括使用更敏感的檢測(cè)器或優(yōu)化樣品富集步驟。

3、數(shù)據(jù)分析與序列匹配

采用jīngquè的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行保留時(shí)間校準(zhǔn)，結(jié)合自動(dòng)化數(shù)據(jù)處理軟件，提高序列分析的準(zhǔn)確性。此外，結(jié)合質(zhì)譜驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果，可提高數(shù)據(jù)的可靠性。

四、實(shí)驗(yàn)誤差控制

1、降低降解副反應(yīng)

在降解過(guò)程中，部分氨基酸（如púānsuān）可能影響后續(xù)序列解析，進(jìn)而影響到N端測(cè)序的結(jié)果。調(diào)整試劑濃度和反應(yīng)條件，可減少非特異性降解。

2、重復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

進(jìn)行多次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，并采用不同批次的試劑和操作條件，以確保測(cè)序結(jié)果的重復(fù)性。

3、標(biāo)準(zhǔn)品與對(duì)照實(shí)驗(yàn)

采用已知序列的標(biāo)準(zhǔn)蛋白進(jìn)行平行測(cè)定，有助于評(píng)估方法的準(zhǔn)確性并校正潛在誤差。

艾德曼降解法仍然是N端測(cè)序的工具，但其成功依賴于嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。通過(guò)提高樣本純度、優(yōu)化反應(yīng)條件、提升檢測(cè)靈敏度并控制實(shí)驗(yàn)誤差，可以顯著提高測(cè)序準(zhǔn)確性。結(jié)合其他分析方法（如質(zhì)譜）進(jìn)行互補(bǔ)驗(yàn)證，將進(jìn)一步增強(qiáng)測(cè)序的可靠性和應(yīng)用范圍。百泰派克生物科技提供zhuānyè蛋白N端序列分析服務(wù)，歡迎聯(lián)系我們！

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，N端測(cè)序，C端測(cè)序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

采用艾德曼降解法的N端測(cè)序：如何優(yōu)化實(shí)驗(yàn)以獲得準(zhǔn)確結(jié)果檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹