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一.   實驗原理：試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人結核桿菌（TB）IgG抗體的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUT OFF值相比較，從而判定標本中人結核桿菌（TB）的存在與否。

二.  人結核桿菌(TB)ELISA試劑盒 雙抗一步夾心法組成及其配置：

三.   常見問題解答：

1.     【高背景或陰性對照值偏高】

可能的原因：陰性對照孔被陽性對照或樣品污染；抗體非特異性結合；酶結合物過濃；孵育溫度過高；底物在使用前曝光；讀板前停留時間過長

上海軒澤康生物為您提供解決方案：洗滌時勿將洗液溢出孔外；建議更換封閉液；檢查酶結合物是否按照說明書規定稀釋；檢查孵育箱的溫度是否正確、穩定；應保存在暗處、避光；加終止液后3分鐘內讀數。

2.     【陽性對照值偏低或低吸光度】

可能的原因: 試劑未平衡至室溫;檢測體積偏小;孵育時間過短;底物受污染;樣本中有抑制劑。

上海軒澤康生物為您提供解決方案：實驗開始前，將試劑盒從冰箱內取出平衡至室溫（20-25℃）；檢查移液器吸液通道是否堵塞；使用計時器，準確孵育時間；使用新配置的試劑，重新實驗；疊氮鈉會抑制HRP酶的活性。

四. 人結核桿菌(TB)ELISA試劑盒 雙抗一步夾心法操作注意事項：

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶溶解后再使用。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  預處理后的樣本請按照操作步驟用稀釋液適當稀釋以達到試劑盒的的最佳檢測效果。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。