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大鼠Toll樣受體4(TLR4) ELISA檢測試劑盒操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

大鼠Toll樣受體4(TLR4) ELISA檢測試劑盒注意事項：

1） 為了避免交叉感染，配置不同濃度標準品，上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽。

2） 混合或重溶蛋白溶液時，盡量避免起沫。

3） 每次孵育時，請使用正確的封板膠可保證結果的準確性。

4） 終止液上板書匈奴應同顯色底物上板順序一致；加入終止液后孔內顏色由藍變黃；若孔內有綠色，則表明孔內液體未混勻請充分混合。