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ALT酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒檢測前準備工作:1. 請提前 20 分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正常現象;放置室溫,輕搖均勻,待結晶溶解后再配置洗滌液。可將 20ml 濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml 工作濃度的洗滌液,未用完的放回 4℃3. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按 1:20 稀釋,即 1 份 20×洗滌緩沖液加 19 份蒸餾水。試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被(ALT)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的(ALT)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
ALT酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒的注意事項:
1) 充分混勻對保證反應結果很重要,在加液后請輕輕晃動整個96板孔,以保證混勻。
2) TMB溶液請勿接觸氧化劑或金屬,否則容易失效。
3) 加樣時請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭,一方面避免交叉污染,另一方面也避免吸取體積的誤差。加樣過程中必須避免氣泡的產生。
4) 檢測標準品和樣品時建議設置重復孔,以確保檢測結果的可信度。
5) 洗滌過程非常重要,洗滌不充分會下降并導致結果誤差較大。
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