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(2)酶標板置4℃,包被過夜。

(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的工作液50μl。

(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。

(6)洗板,同(4)。

(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的工作液100μl。

(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。

(9)洗板,同(4)。

(10)每孔加TMB顯色液100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。

(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。

(12)分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

(13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

人尿膽素(Urobilin)elisa試劑盒的使用常識：
（1）試劑切忌與手接觸（有些試劑有強腐蝕性、等特性）。
（2）要用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，絕不允許用同一種工具同時連續取用多種試劑。取完一種試劑后，應將工具洗凈（藥勺要擦干）后，才可取用另一種試劑。
（3）試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后請及時將瓶放回原處，以免遺忘，帶來不便。
（4）已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內（怕產生原試劑的再次污染）。?

免責聲明：
1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
2.   嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。
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