當前位置:上海昆盟生物科技有限公司>>分子互作專題>>EMSA凝膠遷移阻滯實驗>> EMSA凝膠遷移阻滯實驗
一、技術簡介
EMSA技術即凝膠遷移或電泳遷移率實驗,用于研究DNA/RNA結合蛋白和其相關的DNA/RNA結合序列相互作用的技術;
二、技術原理
將純化的蛋白或細胞粗提液與標記的DNA或RNA探針一同孵育,在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中,DNA-蛋白或RNA-蛋白復合物的遷移率比未結合的探針慢,從而檢測到活化的與DNA或RNA結合的蛋白轉錄或調節因子。
三、應用場景
1.基因表達調控研究:確定轉錄因子與DNA的結合位點和結合特性,研究基因表達的調控機制。
2.疾病機理研究:分析疾病相關基因的表達調控異常,探索疾病的發生發展機制。
3.藥物靶點發現:篩選和鑒定與疾病相關的DNA結合蛋白,為藥物研發提供靶點。
4.信號通路研究:研究信號通路中DNA結合蛋白的活性變化及其對下游基因的影響。
四、技術優勢
1.實驗操作相對簡單,對實驗條件要求不苛刻。
2.可檢測多種核酸分子大小和結構以及廣泛的蛋白大小范圍,能在單個反應體系中檢測不同蛋白與不同核酸分子的結合情況。
3.生物素標記探針穩定、安全、準確且親和力高。
五、樣本類型
新鮮細胞(貼壁細胞/懸浮細胞)、凍存細胞、凍存組織、細胞核蛋白樣本或純化的轉錄因子,部分實驗亦可使用重組表達的蛋白。
六、樣本需求
細胞樣本:約1×10^7個(可以是1個10cm皿,或以懸浮細胞形式存儲于離心管中,或1個T75瓶);
凍存組織:約400mg;
植物組織:約2g;細胞核蛋白、純化轉錄因子、重組表達蛋白等:每張膜至少提供50ul,濃度不低于0.5mg/ml。
七、樣本準備&運輸
活細胞樣本:距離較近的可以將養在皿/T75瓶/離心管內的新鮮細胞樣本常溫快遞(最遲次日達)運輸,本市內可閃送或親自遞送,距離較遠的,可-80℃凍存細胞干冰運輸;
組織樣本&其他液體樣本:-80℃凍存干冰運輸。
八、需提供的試劑
結合蛋白特異性抗體50ul以上,濃度大于0.5mg/ml。
九、實驗周期
2-3周
十、其他
探針序列,如無探針序列,請提供DNA結合蛋白相關信息或相關文獻。
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