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當前位置：深圳市安培生物科技有限公司>>技術文章>>傳代細胞培養實驗操作步驟
細胞
Hanks 胰蛋白酶 EDTA 培養液
吸管 培養瓶
一、貼壁細胞：HeLa細胞的傳代培養
1. 選取生長密度80%左右的HeLa細胞，在生物安全柜中操作，吸去培養皿中的舊培養基，加入2 mL的D-Hanks溶液，漂洗細胞以除去殘留的血清。
2. 吸去培養皿中的D-Hanks溶液，加入2 mL 0.25%胰蛋白酶消化液，于37℃消化2～3 min(如消化程度不夠，可延長時間)，倒置顯微鏡下觀察細胞，當大部分細胞變圓時，輕輕吸去酶消化液（如果有較多細胞漂起，需要直接加入*培養基來終止胰蛋白酶的消化反應）。
3. 加入4 mL*培養基，用移液管反復吹打細胞成為細胞懸液。將細胞懸液轉移到15 mL離心管中，1000 rpm離心5 min。
4. 輕輕吸去上清后用*培養基重懸細胞，把細胞懸液一分為二或者一分為三后分別轉移到新的培養皿中。
5. 接種好的細胞，應在培養皿上標記上細胞名稱、本次傳代日期和操作人，輕輕搖勻后轉移到CO2培養箱中于37℃培養。
6. 細胞培養24 h后，根據培養基的顏色及細胞的生長密度進行相應的操作（更換新鮮培養基或者再次傳代處理）。
二、懸浮細胞或半貼壁細胞的傳代培養
懸浮細胞不貼壁（半貼壁細胞貼壁不緊），所以不需要借助胰蛋白酶消化，具體過程如下：
1. 取狀態良好的細胞，在生物安全柜中操作，用移液管把細胞吹打均勻。
2. 把細胞懸液轉移到15 mL離心管中，1000 rpm離心5 min。
3. 輕輕吸去上清后用*培養基重懸細胞，把細胞懸液一分為二或者一分為三后分別轉移到新的培養皿中。
4. 接種好的細胞，應在培養皿上標記上細胞名稱、本次傳代日期和操作人．輕輕搖勻后轉移到CO2培養箱中于37℃培養。
5. 細胞培養24 h后，根據培養基的顏色及細胞的生長密度進行相應的操作（更換新鮮培養基或者再次傳代處理）。
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