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高效率轉染N2a小鼠神經瘤母細胞的操作方法

時間:2021/11/11閱讀:2192
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轉染條件:

培養板:6孔板

轉染質粒DNA大小: 6000bp

轉染試劑用量:10ul

核酸用量:電訊

轉染時間:48小時

轉染試劑:Advanced DNA RNA轉染試劑(AD600150)

培養基:Z7181-500 胎牛血清

細胞凍存:CE70100T無血清細胞凍存液


操作步驟:

提前 1 天接種細胞:細胞匯合度在 60-80%左右,再進行轉染。

核酸復合物制備:將核酸與轉染試劑按照 1:1 關系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細胞培養基中加入核酸復合物:根據參考用量在細胞中加入核酸復合物,并輕輕混勻;細胞培養基 里面可以含有血清。

細胞換液:轉染 24 小時后對細胞進行正常換液,懸浮細胞轉染過程中不用換液。

分析結果:質粒 DNA 轉染 48-72 小時后熒光檢測轉染效率,48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若進行穩定表達細胞株的篩選,則在轉染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉染后 9 小時熒光檢測轉染效率,48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。


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