成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

深圳市安培生物科技有限公司
中級會員 | 第5年

19126518388

血清系列
細胞轉染
支原體清除
細胞凍存
實驗耗材
分子試劑
細胞增殖與凋亡
Biozellen系列
培養基
ELISA試劑盒
TOYOBO(東洋紡)
ZYMO RESEARCH
Greiner(格瑞納)
IKA(艾卡)
化學發光底物(ECL)
PROSPEC系列
Epigentek系列
微生物檢測
細胞生物學
Corning康寧
解離試劑
細胞類-實驗耗材
原代細胞
植物檢測系列試劑盒
SERANA
BSA
細胞系
生化試劑盒
環境檢測系列試劑盒(AKEN)
類器官培養
緩沖器和解決方案
生物三凝膠基質
細胞因子分子
生物樣本庫
蛋白研究系列
修飾檢測試劑盒

【教程】構建載體其實一點也不難!

時間:2021/8/26閱讀:2360
分享:

我們在研究基因的功能時,逃脫不掉的就是為了我們的實驗目的,可能需要構建各種載體,比如表達載體,克隆載體,基因打靶載體等等。很多人在構建載體的時候都感覺很困難,特別是對于一個剛進入實驗室的新人來說那更是難上加難,*摸不著頭腦。

那是因為其實構建載體是一個不小的工作量,需要經歷很多的過程,比如首先我們需要設計引物引入酶切位點,接下來還需要經歷酶切酶連等過程,只要其中的某一環節出現問題,那最終都會導致實驗失敗。

構建載體最關鍵的一步就是設計引物引入酶切位點,一旦引物設計好,那接下來就非常簡單了,今天重點就來教教大家如何利用 snapgene 輕松獲得構建載體所需的引物序列。 

1. 打開軟件,選擇第一個(紅線標記),然后輸入基因的 CCDS 序列(基因的 CCDS 序列可在 NCBI 數據庫中獲得)


【教程】構建載體其實一點也不難!

【教程】構建載體其實一點也不難!


2. 點擊 ok 后界面如下,圖中顯示的是會切割基因編碼序列的酶


【教程】構建載體其實一點也不難!


3. 接下來點擊最上面的 Enzymes Noncutters,會顯示所有不會切割基因編碼序列的酶,這些酶都是我們可以用的,選酶的標準:要選擇不能切割目的基因序列并且質粒上含有的酶,還有就是最好是實驗室有的酶。

【教程】構建載體其實一點也不難!

【教程】構建載體其實一點也不難!


4. 確定了可以用的酶后,接下來需要確定設計引物時用的這兩種酶,確定方法:這兩種酶最好不要鄰近,最好使用雙酶切有共同 buffer 的酶,兩個酶切位點最好不要是同尾酶(切下來的殘基不要互補),否則效果相當于單酶切。 


5. 確定了所要用的酶之后,接下來需要做的就是設計引物并引入酶切位點(注意:一定要看清楚載體上 promoter 的方向,將 CDS 正向插入到 promoter 后面) 


6. 點擊左下角的 sequence,然后拉取上游一部分基因本身的序列,拉取的時候會顯示拉取的堿基的個數以及 Tm 值,拉取到 Tm 值 55 度左右就可以(55 度以上最好)

【教程】構建載體其實一點也不難!


7. 然后點擊 primer——add primer,選擇 top strand


【教程】構建載體其實一點也不難!

【教程】構建載體其實一點也不難!


8. 點擊 insertions,在 site 位置處選擇你準備引入的酶,比如我要引入 EcoR I,那我就選擇它,然后點擊 insert,這樣我們就引入了該酶的酶切位點。


【教程】構建載體其實一點也不難!

【教程】構建載體其實一點也不難!




9. 接下來需要添加保護堿基,一般所有的酶的保護堿基都加三個,加哪個堿基沒有要求,使 GC 含量及 Tm 值適中即可。


【教程】構建載體其實一點也不難!


10. 這樣上游引物就設計好了,接下來需要檢測一下引物是否會形成發卡結構,可以應用 OligoCalc,如果發現會形成發卡結構,那就需要對引物序列做出一些調整,直到發卡結構消失。 


11. 接下來拉取基因的下游的一部分序列,用同樣的方法設計好下游引物,有一點需要注意的是,設計下游引物的時候選擇 bottom strand。 


這樣構建載體所需的引物就設計好了,怎么樣,是不是感覺其實也沒有那么難,接下來就可以構建屬于你自己的載體了。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
撥打電話
在線留言
主站蜘蛛池模板: 亚洲日韩欧美综合| 韩国年轻妈妈3| 国产AV电影区二区三区曰曰骚网| 日韩有码中文字幕第一页| 91亚洲精品中文字幕| 在线无码中文字幕一区| 国产精品福利午夜在线观看| 丰满熟女人妻出轨视频在线| 亚洲精品国产国语| 豪妇荡乳1一5潘金莲| 黄色视屏在线免费播放| 国产精品99精品无码视亚| 中文字幕A片视频一区二区| 日韩精品AV一区二区三区| 一边摸一边桶一边脱免费| 久久久久久久久亚洲av| 久久久久女人精品毛片| 亚洲精品久久久久中文另类| 日韩精品人成在线播放| 一品二品三品中文字幕| 神马影院我不卡手机板| 欧美一区二区三区熟妇| 91啪国产福利在线| 国产在线aaa片一区二区99| 免费无码一区二区三区A片不卡| 国产毛片欧美毛片久久久| 动漫小黄片免费| 国产亚洲精品久久精品6| 亚洲精品99久久久久久| 91三级三级三级黄色| 欧美激情老少妇| 国产极品JK白丝喷白浆图片| 国产麻豆精品久久久| 亚洲中文自拍另类aⅴ片| 中文字幕av精久久| 呦男呦女视频精品八区| 国产最新乱伦无码视频| 中文字幕日韩精品有码视频| 午夜毛片在线观看| 麻豆WWWCOM内射软件| 国产精品怡红院永久免费|