人金屬肽酶含血小板反應蛋白4試劑盒 

檢測范圍：96T

4pg/ml-160pg/ml

使用目的：

人金屬肽酶含血小板反應蛋白4試劑盒 用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中金屬肽酶含血小板反應蛋白基元4（ADAMTS4）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人金屬肽酶含血小板反應蛋白基元4（ADAMTS4）水平。用純化的人金屬肽酶含血小板反應蛋白基元4（ADAMTS4）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入金屬肽酶含血小板反應蛋白基元4（ADAMTS4），再與HRP標記的金屬肽酶含血小板反應蛋白基元4（ADAMTS4）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的金屬肽酶含血小板反應蛋白基元4（ADAMTS4）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人金屬肽酶含血小板反應蛋白基元4（ADAMTS4）濃度。

試劑盒組成

標本要求 

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

• 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

• 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
• 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。