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小鼠施旺細(xì)胞(永生化)
  • 小鼠施旺細(xì)胞(永生化)
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更新時(shí)間:2025-05-13 14:49:24

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一、永生化小鼠施旺細(xì)胞簡介:雖然原代小鼠施旺細(xì)胞更能真實(shí)地反映施旺細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的生理狀態(tài),但是一方面原代分離培養(yǎng)小鼠施旺細(xì)胞周期長及對技術(shù)人員經(jīng)驗(yàn)要求較高,另一方面此原代細(xì)胞生長較慢及在體外不能傳代,這些不利因素制約了原代小鼠施旺細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室的廣泛應(yīng)用

永生化小鼠施旺細(xì)胞簡介:

雖然原代小鼠施旺細(xì)胞更能真實(shí)地反映施旺細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的生理狀態(tài),但是一方面原代分離培養(yǎng)小鼠施旺細(xì)胞周期長及對技術(shù)人員經(jīng)驗(yàn)要求較高,另一方面此原代細(xì)胞生長較慢及在體外不能傳代,這些不利因素制約了原代小鼠施旺細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室的廣泛應(yīng)用。我公司的研究團(tuán)隊(duì)擁有多年原代細(xì)胞分離培養(yǎng)及細(xì)胞永生化服務(wù)研究經(jīng)驗(yàn),成功建立了永生化小鼠施旺細(xì)胞。
施旺細(xì)胞(Schwann cell)也稱雪旺細(xì)胞,是一種周圍神經(jīng)的膠質(zhì)細(xì)胞,為軸突提供支持,并且形成髓鞘。其功能極其活躍,可分泌多種活性物質(zhì)(如神經(jīng)營養(yǎng)因子、細(xì)胞外基質(zhì)及粘附因子等),其分泌的物質(zhì)對維持神經(jīng)纖維的存活、生長及再生具有重要意義。
本公司生產(chǎn)的永生化小鼠施旺細(xì)胞采用酶解法和基因轉(zhuǎn)染制備而來,細(xì)胞總量約為1×106/T25方瓶,細(xì)胞純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法

1 您收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作:

取出 T25 方瓶, 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入 37 , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時(shí), 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液(備注: 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞, 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長,以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡 最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2 、細(xì)胞傳代:
1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液, PBS 清洗細(xì)胞 3 次;
2)添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm/min,離心 5min
3)棄上清,沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代, 最后放入 37 ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細(xì)胞貼壁后, 觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3 、細(xì)胞凍存
1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次;
2)添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm/min,離心 5min
3)用適當(dāng)量的凍存液(培養(yǎng)液: FBSDMSO=7:2:1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;
4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20 1h,然后將其移入-80℃過夜, 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期儲(chǔ)存(或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲(chǔ)存)。
4、細(xì)胞復(fù)蘇:
1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具 快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含 5ml 培養(yǎng)液無菌離心管中,1000rpm 離心 5min ,然后加入 5ml 全培養(yǎng)液混勻細(xì)胞, 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶中, 放置于 37 , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
3
第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

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