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一、永生化小鼠肝竇內皮細胞簡介：雖然原代小鼠肝竇內皮細胞更能真實地反映肝竇內皮細胞在小鼠體內的生理狀態，但是一方面原代分離培養肝竇內皮細胞周期長和對實驗設備、試劑及技術人員經驗要求較高，另一方面此原代細胞在體外的生長增殖能力非常緩慢有限，以至于此細胞不能傳代，這些不利因素制約了原代小鼠肝竇內皮細胞在實驗室的廣泛應用

一、永生化小鼠肝竇內皮細胞簡介：

雖然原代小鼠肝竇內皮細胞更能真實地反映肝竇內皮細胞在小鼠體內的生理狀態，但是一方面原代分離培養肝竇內皮細胞周期長和對實驗設備、試劑及技術人員經驗要求較高，另一方面此原代細胞在體外的生長增殖能力非常緩慢有限，以至于此細胞不能傳代，這些不利因素制約了原代小鼠肝竇內皮細胞在實驗室的廣泛應用。我公司的研究團隊擁有多年原代細胞分離培養及細胞永生化服務研究經驗，成功建立了永生化小鼠肝竇內皮細胞。
肝血竇是相鄰肝板之間的腔隙，是一種特殊的毛細血管。肝血竇的竇壁由肝細胞的細胞膜構成，故肝血竇的通透性較大，有利于肝細胞與血流之間進行物質交換。在電鏡下觀察，肝血竇內皮細胞與肝細胞之間有一狹窄間隙，稱竇周隙(Disse腔)。肝竇內皮細胞是肝臟非實質細胞的主要細胞群，由肝竇內皮細胞構成的肝竇壁是全身毛細血管壁中缺乏基膜的毛細血管窗孔，足肝竇內皮細胞特征性的結構。肝竇內皮細胞在調節肝竇血流與周圍組織的物質交換中起有效的中樞性的作用，因此肝竇內皮細胞對于維持正常的肝功能起十分重要的作用。同時肝竇內皮細胞在肝臟的生理病理過程中發揮著諸多的重要功能。
本公司生產的永生化小鼠肝竇內皮細胞采用體外灌注和密度梯度離心法和基因轉染制備而來，細胞總量約為1×10⁶/T25方瓶，細胞純度可達95%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
二、使用方法

1 、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細胞培養箱中靜置 2-3 小時，以穩定細胞狀態，然后打開瓶子回收瓶子中培養液作為后續培養此細胞的培養液（備注：先使用瓶子中培養液培養及盡快凍存保種細胞，保存種子后再嘗試自己完全培養液培養觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養液不適合細胞生長造成細胞狀態不好或死亡） ，最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養。
2 、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）棄上清，沉淀細胞用 10ml 培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃ ,5%CO2 細胞培養箱中培養；
4）待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。
3 、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）用適當量的凍存液（培養液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過夜， 24h 后轉入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉移液氮中長期儲存）。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞轉移至含 5ml 培養液無菌離心管中，1000rpm 離心 5min ，然后加入 5ml 完全培養液混勻細胞，將細胞懸液轉移至 T25 培養瓶中，放置于 37℃ , 5%CO2 細胞培養箱中培養；
3）第二天，換用新鮮培養基繼續培養。

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