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一、小鼠氣管平滑肌細胞簡介哮喘是一種常見的氣道慢性炎癥性疾病，目前我國有約2000萬人罹患哮喘

一、小鼠氣管平滑肌細胞簡介

哮喘是一種常見的氣道慢性炎癥性疾病，目前我國有約 2000萬人罹患哮喘。近些年，由于霧霾等空氣質量與環境污染程度的日益惡劣，呼吸系統疾病也逐漸成為了范圍影響人類健康最嚴重的慢性疾病之一。據世界衛生組織預測，到2025年，世界上將會有 4 億人患上哮喘。哮喘發病癥狀眾多，早期表現為過敏性炎癥，后期由于氣管平滑肌增生，阻塞氣管，導致氣道狹窄、氣道高反應及氣道重塑，患者出現胸悶、氣喘等癥狀，嚴重時危及生命。因此，對哮喘的發病機理與治療的研究是至關重要的。在對哮喘發病機制的研究中，氣管平滑肌是針對氣道阻塞性癥狀的主要研究目標之一，針對氣管平滑肌細胞的形態學觀察與細胞增殖速率的測量是在細胞生物學水平研究哮喘發病機制的常用手段。
本公司生產的小鼠氣管平滑肌細胞采用酶解法制備而來，細胞總量約為5×10⁵/T25方瓶，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
二、使用方法

1 、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細胞培養箱中靜置 2-3 小時，以穩定細胞狀態，然后打開瓶子回收瓶子中培養液作為后續培養此細胞的培養液（備注：先使用瓶子中培養液培養及盡快凍存保種細胞，保存種子后再嘗試自己完全培養液培養觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養液不適合細胞生長造成細胞狀態不好或死亡） ，最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養。
2 、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）棄上清，沉淀細胞用 10ml 培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃ ,5%CO2 細胞培養箱中培養；
4）待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。
3 、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）用適當量的凍存液（培養液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過夜， 24h 后轉入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉移液氮中長期儲存）。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞轉移至含 5ml 培養液無菌離心管中，1000rpm 離心 5min ，然后加入 5ml 完全培養液混勻細胞，將細胞懸液轉移至 T25 培養瓶中，放置于 37℃ , 5%CO2 細胞培養箱中培養；
3）第二天，換用新鮮培養基繼續培養。

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